[发明专利]分离培养羊种布鲁氏菌的方法

权利要求书

1.组合物在制备用于分离培养羊种布鲁氏菌的培养基中的应用，所述组合物由红霉素和氨苄青霉素钠组成，各成分在培养基中的含量分别为：红霉素6-15mg/L、氨苄青霉素钠2-7mg/L。

2.选择性双相培养基，其特征在于，由固体培养基和液体培养基两部分组成；

其中，所述固体培养基包含酪蛋白胰酶消化物15g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物5g/L、氯化钠5g/L、红霉素6-15mg/L、氨苄青霉素钠2-7mg/L、琼脂15g/L；

所述液体培养基包含酪蛋白胰酶消化物15g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖2.5g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、红霉素6-15mg/L、氨苄青霉素钠2-7mg/L、聚茴香脑磺酸钠35mg/L和复合维生素5mg/L。

3.权利要求2所述选择性双相培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、制备固体培养基：称取酪蛋白胰酶消化物15g、大豆木瓜蛋白酶水解物5g、氯化钠5g、琼脂15g，用1L去离子水加热溶解后，分装20-30mL置于双相培养瓶中，121℃高压灭菌15-20min；称取氨苄青霉素钠用双蒸水溶解，过滤除菌后加入冷却至50℃未凝固的培养基中，终浓度为2-7mg/L；称取红霉素用无水乙醇溶解，过滤除菌后加入冷却至50℃未凝固的培养基中，终浓度分别为6-15mg/L；混匀后平置至冷却凝固；

B、制备液体培养基：称取酪蛋白胰酶消化物15g、大豆木瓜蛋白酶水解物3g、氯化钠5g、磷酸氢二钾2.5g，用1L去离子水溶解后121℃高压灭菌15-20min，得到溶液I；称取氨苄青霉素钠用双蒸水溶解，过滤除菌后加入培养基中，终浓度为2-7mg/L；称取红霉素用无水乙醇溶解，过滤除菌后加入所述溶液I中，使其终浓度分别为6-15mg/L；称取葡萄糖、聚茴香脑磺酸钠、复合维生素用去离子水溶解，使其浓度分别为250g/L、35g/L、5g/L，过滤除菌后加入所述溶液I中，使其终浓度分别为葡萄糖2.5g/L、聚茴香脑磺酸钠35mg/L和复合维生素5mg/L，每瓶双相培养瓶中分装25-35mL。

4.权利要求2所述选择性双相培养基在分离培养羊种布鲁氏菌中的应用；所述应用为非疾病诊断目的。

5.分离培养羊种布鲁氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待测液体样本分成两等份，一份注入选择性双相培养瓶中，另一份注入普通双相培养瓶中，将双相培养瓶放入37℃5-10％CO₂培养箱中培养，液相充分浸润固相4-12h后倾斜培养；

其中，所述选择性双相培养瓶装有权利要求2所述的选择性双相培养基；

所述普通双相培养瓶装有普通双相培养基，所述普通双相培养基不含有权利要求1所述的组合物；

(2)培养1-4周后，观察培养结果：

有细菌感染的情况：

a.双相培养瓶中可见液相部分浑浊，固相部分可见单菌落生长；

b.若单菌落呈圆形，直径1-2mm，边缘光滑，菌落呈光泽、半透明的浅黄色，此为疑似布鲁氏菌；

c.若选择性双相培养瓶及普通双相培养瓶中均有此单菌落生长，则为羊种布鲁氏菌；若选择性双相培养瓶无此单菌落生长而普通双相培养瓶有此单菌落生长，则为牛种、猪种或犬种布鲁氏菌；若选择性双相培养瓶有此单菌落生长而普通双相培养瓶无此单菌落生长，则试验失败，需重复进行验证；

无细菌感染的情况：

若选择性双相培养基及普通培养基均液相部分清澈，固相部分无单菌落或菌苔生长，则样品中未有细菌感染；

所述方法为非疾病诊断目的。

6.选择性需氧血培养基，其特征在于，所述选择性需氧血培养基是包含酪蛋白胰酶消化物17g/L、大豆木瓜蛋白酶水解物3g/L、聚茴香脑磺酸钠35mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、红霉素6-15mg/L、氨苄青霉素钠2-7mg/L、氨基酸复合物5mg/L和复合维生素5mg/L的液体培养基。