[发明专利]宫颈癌相关基因甲基化的检测引物、探针、试剂盒及方法

说明书

本发明提供了一种宫颈癌相关基因甲基化的检测引物、探针、试剂盒及方法，涉及生物技术领域。本公开通过设计检测宫颈癌相关基因甲基化的检测引物、探针、试剂盒及方法，采用多重Q‑MSP的方法检测ADCYAP1、AJAP1、CDKN2A、GATA4、LHX8、PAX1、SOX1和MIR214这8个与宫颈癌相关的基因的甲基化程度，灵敏度高，特异性强，且适合大规模人群筛查和常规分子诊断。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种宫颈癌相关基因甲基化的检测引物、探针、试剂盒及方法。

背景技术

宫颈癌是发生在宫颈的恶性肿瘤，可分为两种组织学类型：腺型(AC)和鳞状细胞癌(SCC)，SCC较为常见，发生率为70％。AC起源于排列在宫颈管内的腺细胞，而SCC起源于排列在宫颈外部的鳞状细胞，该鳞状细胞向宫颈外开口生长。鳞状细胞和薄而扁平的腺细胞所在的区域称为转化区，大多数肿瘤起源于该区。发生宫颈癌的最常见原因是持续性感染人乳头瘤病毒(HPV)，HPV占女性宫颈癌病例的90-100％，尤其是35岁以上的女性。

目前常用的宫颈癌筛查方式有宫颈细胞检测和HPV核酸检测。宫颈细胞检测属于细胞学的筛查，需要严格的操作环境，没有普遍性，并且细胞学筛查的敏感性极低，结果可靠性差；HPV核酸检测虽然具有较高的敏感性和较强的特异性，但实验室处理需求与成本均较高，结果获取周期较长。因此目前亟需一种方便快捷、灵敏度高、特异性强的宫颈癌筛查方式。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明的目的是为了提供一种可以克服目前甲基化基因检测技术灵敏度不够高、特异性差等缺点的且适用大规模人群的方便快捷的宫颈癌相关基因甲基化的检测引物、探针、试剂盒及方法。

为了实现上述目的，本发明采用了以下的技术方案：

本发明提供了一种宫颈癌相关基因甲基化的检测引物，上述检测引物包括：

针对ADCYAP1基因：

上游引物ADCYAP1-F：AGATATTAACGTTAGACGGCG(如SEQ ID NO.1所示)；

下游引物ADCYAP1-R：GACTCCGAACCATCGAAA(如SEQ ID NO.2所示)；

针对AJAP1基因：

上游引物AJAP1-F：TTTCGCGTGTTATTCGGT(如SEQ ID NO.3所示)；

下游引物AJAP1-R：GACAACGCAAACGAAACCT(如SEQ ID NO.4所示)；

针对CDKN2A基因：

上游引物CDKN2A-F：CGGAGTTTAATTGCGTCGAT(如SEQ ID NO.5所示)；

下游引物CDKN2A-R：AACACCACCAACGTATCCA(如SEQ ID NO.6所示)；

针对GATA4基因：

上游引物GATA4-F：TGGAGAGTGGGTTTTGAAAGTT(如SEQ ID NO.7所示)；

下游引物GATA4-R：AACACCCGCGACCACAAA(如SEQ ID NO.8所示)；

针对MIR124基因：

上游引物MIR124-F：TTGGTGAATTAGAGTATGCGTGT(如SEQ ID NO.9所示)；

下游引物MIR124-R：TCCAAACGACTCCGCAAC(如SEQ ID NO.10所示)；

针对LHX8基因：