[发明专利]固定化酶、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，向待固定的酶中加入PEI，然后加入无官能团修饰的Fe₃O₄颗粒，进行搅拌，所述PEI包覆所述Fe₃O₄颗粒，得到第一反应体系；

S2，向所述第一反应体系中加入蛋白沉淀剂进行蛋白的沉淀，得到第二反应体系；

S3，向所述第二反应体系中加入交联剂交联形成磁性交联酶聚集体；

优选的，所述待固定的酶为酶液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PEI的分子量为600～70000Da；

优选的，所述PEI的pH值在8～11之间；

优选的，所述PEI的浓度在0.5％～2.5％之间。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Fe₃O₄颗粒为所述酶液质量的2％～10％。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂为无水乙醇、丙酮、乙腈、硫酸铵或聚乙二醇；

优选的，所述聚乙二醇的分子量为2～8KDa；

优选的，所述聚乙二醇的浓度为20％～50％，更优选为30％。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，

以所述待固定的酶的酶液体积计，所述蛋白沉淀剂为2～8倍体积无水的乙醇、2～8倍体积的丙酮、2～8倍体积的乙腈和终浓度为40％～80％的硫酸铵；

优选的，所述蛋白沉淀剂为7倍体积的无水乙醇、5倍体积的丙酮、3倍体积的乙腈，或终浓度为60％的硫酸铵。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述交联剂为1％～10％的戊二醛、乙二醛、硼酸、三氯聚氰、京尼平、环氧氯丙烷或缩水甘油醚类交联剂。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述S1的反应温度为2～8℃；所述S2的反应温度为2～8℃；所述S3的反应温度为2～8℃；

优选的，所述S3的产物用纯化水清洗，用磁铁分离得到所述磁性交联酶聚集体。

8.一种固定化酶，其特征在于，所述固定化酶通过如权利要求1至7中任一项所述的制备方法制备得到。

9.根据权利要求8所述的固定化酶，其特征在于，所述固定化酶为转氨酶、嘧啶核苷磷酸化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、酮还原酶、烯还原酶、亚胺还原酶、氨基酸脱氢酶或环己酮单加氧酶的固定化酶；

优选的，所述固定化酶为Aspergillus fumigatus来源的转氨酶、Thermusthermophiles来源的嘧啶核苷磷酸化酶、Geobacillus stearothermophilus来源的嘌呤核苷磷酸化酶、Acetobacter sp.CCTCC M209061来源的酮还原酶、Saccharomycescerevisiae来源的烯还原酶、Streptomyces sp.来源的亚胺还原酶、Bacillus cereus来源的氨基酸脱氢酶或Brachymonas petroleovorans来源的环己酮单加氧酶的固定化酶。

10.如权利要求8或9所述的固定化酶在水性缓冲液反应体系或有机溶剂反应体系中的应用。