[发明专利]载体生产

说明书

本发明涉及载体生产。本发明涉及包膜病毒颗粒生产细胞或包装细胞，其中所述细胞被基因工程改造以减少细胞表面上的MHC‑I的表达。

本申请是申请日为2015年7月13日的中国专利申请201580049356.7“载体生产”的分案申请。

技术领域

本发明涉及显示水平降低的表面暴露抗原的细胞。更具体地，本发明涉及细胞的基因工程改造，以减少细胞表面上主要组织相容性复合体I类（MHC-I）的表达。特别地，本发明涉及这种细胞在包膜病毒颗粒生产中的用途。

背景技术

基因治疗包括将遗传物质掺入细胞以治疗或预防疾病。遗传物质可以用那些基因的功能性拷贝补充缺损基因，使不适当功能的基因失活或将新的治疗基因引入细胞。

遗传物质向细胞的递送可以通过使用促进核酸转移的载体来实现。病毒可以被工程改造以将目标核苷酸（NOI）递送到靶细胞，并且通常在基因治疗中用作载体。迄今为止用于基因治疗的病毒包括逆转录病毒、腺病毒（AdV）、腺相关病毒（AAV）、单纯疱疹病毒（HSV）和牛痘病毒。

逆转录病毒，例如α-逆转录病毒、γ-逆转录病毒、慢病毒和泡沫病毒，对于基因治疗特别有用，因为它们允许校正遗传物质稳定整合到靶细胞中。在基于用于以下的源自γ-逆转录病毒的载体的临床试验中已经实现了治疗益处：腺苷脱氨酶严重联合免疫缺陷（ADA-SCID; Aiuti，A.等人（2009） N. Engl. J. Med. 360：447- 58）、X-连锁性严重联合免疫缺陷（SCID-X1; Hacein-Bey-Abina，S.等人（2010） N. Engl. J. Med. 363：355-64）和Wiskott-Aldrich综合征（WAS; Boztug，K.等人（2010） N. Engl. J. Med. 363：1918-27）。此外，慢病毒载体已经用作治疗X-连锁性肾上腺脑白质营养不良的递送载体（ALD;Cartier，N.等人（2009）Science 326：818-23），和最近用于异染色性脑白质障碍症（MLD;Biffi，A.等人（2013）Science 341：1233158）和WAS（Aiuti，A.等人（2013）Science 341：1233151）。在临床前研究中，也已经静脉内施用慢病毒载体用于血友病的小鼠和狗模型中的该疾病的肝脏定向基因治疗（Cantore A.等人，Blood 2012; Matsui H.等人，Mol Ther2011; Cantore A.等人，Science Translational Medicine 2015 7：277ra28）。然而，与在基因治疗中使用病毒载体相关的显著问题是它们被靶生物体的免疫系统识别。在包膜病毒载体颗粒（例如逆转录病毒载体颗粒）的情况下，可以识别显示在病毒包膜表面上的膜结合蛋白，并且可以中和病毒颗粒本身。此外，在感染靶细胞时，病毒包膜与细胞膜整合，并因此病毒包膜蛋白可以显示在细胞表面上或保持与细胞表面的紧密结合。因此，免疫系统也可以靶向病毒载体颗粒已经感染的细胞。这两种效应可能导致通过病毒载体的NOI递送的功效的降低。

病毒颗粒包膜通常源于生产细胞的膜。因此，在病毒颗粒从其中芽生的细胞膜上表达的膜蛋白可以掺入病毒包膜中。主要组织相容性复合体I类（MHC-I）是一种这样的细胞膜蛋白，并且因为其在性质上是高度多态性的，此外它是身体免疫应答的主要靶标（McDevitt H.O.（2000）Annu. Rev. Immunol. 18：1-17）。

暴露于产生逆转录病毒载体的细胞的质膜上的MHC-I分子在载体芽殖过程中掺入病毒颗粒包膜中。源自生产细胞并掺入病毒颗粒中的这些MHC-I分子又可以转移到转导细胞的质膜上。或者，由于病毒颗粒吸收并保持结合到靶细胞膜的趋势，MHC-I分子可保持与转导细胞膜紧密结合。