[发明专利]一种多细胞亚群检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种多细胞亚群检测试剂盒，该试剂盒包括两套不同荧光基团偶联的小分子抗体、反应缓冲液及红细胞裂解液。抗体包括APC/CY7标记的CD3分子、BV605标记的CD4分子、Alexa700标记的CD8分子、Percp/Cy5.5标记的HLA‑DR分子、APC标记的CD45RA分子、FITC标记的CD19分子、BB700标记的CD197分子、APC标记的CD16分子以及CD56标记的PE分子。其中，CD3、CD19、CD56、CD16及HLA‑DR荧光抗体组合为B套装，CD3、CD4、CD8、CD45RA及CD197荧光抗体组合为T套装。本发明还提供了多细胞亚群检测试剂盒的用途。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体地说，是一种多细胞亚群检测试剂盒及其应用。

背景技术

多发性骨髓瘤(Multiple myeloma，MM)是一种浆细胞恶性血液病，其特征是骨髓中的克隆性浆细胞异常增殖，伴有单克隆免疫球蛋白的异常积累，继而出现破坏性骨损伤、肾损伤、贫血和高钙血症。MM是发达国家第二常见的血液恶性肿瘤，在临床表现、预后和治疗反应方面具有高度异质性。尽管治疗方法不断发展，相当多的MM患者仍然会经历多次疾病复发，并最终死于疾病本身或治疗相关并发症。因此，早期识别疾病并寻找有效的预后指标，以指导对患者进行精准的危险分层，制定个体化治疗方案，一直是临床关注的重点。

MM的致病机制复杂，目前尚未得到清楚的探究，目前认为其发病主要受两种相互作用的机制影响，即恶性浆细胞的髓内演变和免疫微环境的进行性功能障碍。MM的免疫微环境异常通常表现为T细胞、B细胞和NK细胞的功能和数量受到抑制，免疫抑制性细胞因子的产生增加及免疫细胞中抑制性免疫检查点的表达增加等。骨髓瘤细胞和免疫抑制微环境之间的相互作用被发现与疾病进展相关，且免疫微环境的异常提示患者预后不佳。现有的最新公认MM分期系统为国际骨髓瘤工作组2014年制定的修订后ISS分期(Rivsed-International Staging System，R-ISS)系统，包括血清白蛋白和血清β2微球蛋白，以及细胞遗传学的高危因素检测。然而，目前的分期标准仍无法准备预测患者的治疗反应情况。近年来，部分研究发现了新的MM预后免疫标记物，如Th22细胞的比例、血浆IL-17的水平以及中性粒细胞和单核细胞的相对比例等，对于疾病的预后有着指导作用由此可见，MM患者免疫亚群的变化对于患者预后十分关键，免疫亚群对MM患者具有重要的预后价值。

中国专利文献CN：202110317284.7，公开了一种检测多发性骨髓瘤治疗效果的抗体组合物及其试剂盒和应用，抗体组合物包括：第一组抗体CD138、抗体CD38、抗体CD45、抗体CD269和抗体CD27组成；第二组抗体由抗体CD138、抗体CD38、抗体CD45、抗体CD56、抗体CD19、抗体ckappa和抗体clamda组成。本发明提供的抗体组合方案包含了既往从未被临床用于外周血肿瘤浆细胞检测的流式抗体组合，并且规定了检测的细胞数量，规范的操作步骤，明确了敏感度需要达到的程度。

发明内容

第一方面，本发明提供了一种多细胞亚群检测试剂盒，包括两组不同荧光基团偶联的小分子抗体，其中：第一组由抗体CD3、抗体CD19、抗体CD56、抗体CD16及抗体HLA-DR分子组成为B套装；第二组抗体由抗体CD3、抗体CD4、抗体CD8、抗体CD45RA及抗体CD197组成为T套装。

作为本发明的一个优选例，所述试剂盒还包括反应缓冲液和红细胞裂解液。

第二方面，本发明提供了所述的试剂盒在制备检测多发性骨髓瘤治疗效果的诊断试剂中的应用。

第三方面，本发明提供了所述的试剂盒在制备多发性骨髓瘤预后监测的免疫组化试剂中的应用。

本发明的优点在于：

(1)目前MM的预后情况缺乏系统性免疫评估方法，且多数方法设计骨髓采样，取样较困难且对患者损伤较大，检测时间长，本发明综合多个免疫细胞亚群，根据外周血免疫亚群的变化，可快速完成治疗效果预测，对患者损伤小。