[发明专利]miR-55在抑制非酒精性脂肪性肝纤维化中的应用

说明书

本发明要求保护外源miR‑55在抑制非酒精性脂肪性肝纤维化中的应用。膈下逐瘀汤经高温煎煮后溶液中具有稳定且高表达的miR‑55，通过给大鼠灌胃合成miR‑55及膈下逐瘀汤，证明方中外源性miR‑55能够进入血液，富集在肝脏，并可以干预非酒精性脂肪性肝纤维化。

技术领域

本发明属于生物药物领域，涉及miR-55在抑制非酒精性脂肪性肝纤维化中的应用。

背景技术

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是常见的慢性肝病之一，该病是指除酒精这一主要致病因素外，肝组织脂质代谢异常引起的脂肪异常堆积的综合性病症。NAFLD作为一个进展性疾病，主要包括三个主要病理阶段：非酒精性单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及非酒精性脂肪性肝纤维化和肝细胞癌。由于该病与体内脂质代谢紊乱密切相关，因此随着肥胖症、糖尿病等代谢紊乱病症发病率的升高，NAFLD发病率也持续增高。肝纤维化作为NAFLD的发展过程中的关键阶段，主要表现为肝脏损伤，肝组织纤维样变，终末期会发展为肝硬化甚至原发性肝癌，因此肝纤维化的发展与慢性肝病发病率、死亡率的关系最为密切。如果能够在早期对非酒精性脂肪性肝纤维化进行诊断及干预，可以在缓解本病临床表现的同时，逆转纤维化向慢性肝病晚期发展。

根据传统中医学病因病机理论，非酒精性脂肪性肝纤维化并没有与之相对应的中医病名，根据NAFLD临床表现故将其归为“胁痛”“肝癖”“肥气”等。中医治疗NAFLD具有多层次，多靶点的优势，能够根据患者个人体质、整体状态、疾病进展灵活辩证，适当配伍，结合调整饮食结构，恢复人体内在阴阳平衡状态，实现中医理论中阴平阳秘的内在环境，最终达到在产生最少副作用的同时，达到治疗NAFLD的目的。

膈下逐瘀汤是清代医家王清任创立的名方，本方擅长疏肝行气止痛，配伍严谨，方中诸药均对机体紊乱的气血做以调理，尤擅活化肝脏所在的膈下瘀血，因此对以气滞血瘀为病机的非酒精性脂肪性肝纤维化具有较好的临床疗效。

成熟的microRNA(miRNA)长度约为18-24个核苷酸，通过破坏mRNA稳定性或阻止mRNA翻译来沉默基因表达，与mRNA和沉默基因中的互补序列互补参与生理活动，超过60％的人蛋白质编码基因受miRNA调控，因此人体生理活动与miRNA密切相关。若miRNA核苷酸序列与mRNA靶标中的序列不能完全互补，会导致mRNA翻译受阻，抑制miRNA或mRNA降解，因此miRNA能够参与广泛生理活动。研究发现，miRNA除了可以内源性合成外，还可以从外界摄入获得，且外源性的miRNA在进入人体之后能够发挥跨界调控宿主生理功能的作用。

2012年，外源性miRNA首次被证实存在于人和小鼠血液中。张辰宇(Zhang L等，2012)等发现外源植物miRNAs在人血清中长期存在，测序结果显示在我国健康受试者中发现了约30个已知的植物miRNA，其中MIR156a和MIR168a显示出相当高的表达水平，进一步的体外内研究表明，食源性外源植物MIR168a可以通过小鼠胃肠道进入循环和各种器官，特别是肝脏。小鼠在被喂饲富含miR168a大米后，血清中miR168a表达升高，提示植物miRNA能被吸收进入血循环。

Huang(Huang H等，2017)等人通过改进后的植物miRNA检测方法，在玉米及大豆中检测到大量miR156a、miR164a和miR167a，通过qRT-PCR检测哺乳动物循环吸收外源性膳食miRNA情况，对饲喂玉米和大豆的C57BL/6小鼠的血浆、肝脏和粪便样本进行分析，结果表明依旧可以检测到植物miRNA。Liu(Liu Y C等，2017)等人从410份人类血浆miRNA测序数据中鉴定出丰富的植物miRNAs序列，其中相对含量较高的是外源植物性miR2910，该miRNA是水果和蔬菜中特有的miRNA，此外该miRNA与has-miR-4259和has-miR-4715-5p具有相同的6mer和7mer-A1靶标种子序列，提示相同的靶标种子序列可能是外源性miRNA能稳定存在于人体内的前提。