[发明专利]确定配体与受体之间的相互作用的样品保持器组件

说明书

本公开涉及一种确定配体与受体之间的相互作用的样品保持器组件。受体可以是经固定的。本公开还涉及一种包括功能化的测试孔壁的样品保持器组件，其可以与全内反射荧光源组合使用。

本申请是分案申请，其原申请的国际申请号为PCT/EP2019/070925，国际申请日为2019年08月02日，中国国家申请号为201980047443.7，进入中国国家阶段的进入日为2021年01月15日，发明名称为“确定配体与受体之间的相互作用的方法”。

技术领域

本公开涉及一种确定第一配体(例如测试化合物)与受体(例如靶分子)之间的相互作用的方法。本公开还涉及一种用于所述方法的样品保持器组件。

背景技术

在药物开发中使用生物传感器来产生结合动力学数据，在化合物优化过程中这些数据可用于进一步了解结构-动力学关系。动力学信息通常通过基于微流体的生物传感器平台(例如表面等离振子共振(SPR))推导出，因为优化的流控技术和高采样速率允许准确描述分子结合和解离过程。关于扩展解离过程的信息最终可提供增强化合物功效和安全性的可能性，并因此在与相应的药代动力学特征相关联时可有助于确保治疗成功。

所有光学生物传感器平台都遵循相同的指导原则：将一个相互作用伴侣(通常是药物靶蛋白、寡核苷酸或甚至整个细胞)附着到生物传感器表面。随后用含有测试化合物的溶液挑战该经修饰的表面，以获得直接的结合信息，或研究在与细胞系统一起工作时结合的生物学后果。这种测定配置称为直接结合测定(DBA)。

表面等离子体共振(SPR)和光波导器(OWG)利用了倏逝波现象，因此能够测量与传感器表面的分子质量变化成比例的折射率变化。相反，生物层干涉测量法(BLI)通过分析干涉图样来工作，该干涉图样分析能够监视与传感器直接接触的层的有效光学厚度的变化。所有平台的共同点是能够对结合相互作用进行时间解析测量，尤其是在使用基于微流体的系统时。由于光学生物传感器系统不需要对所用试剂进行任何标记，因此它们通常被称为无标记技术，旨在减少可能因标记靶标或化合物而引入的测定伪像的数量。

基于微流体的生物传感器平台的一个共同特性是需要进行两个单独的实验。首先，使传感器表面与分析物接触。由此测量反应，反应的速率在最简单的情况下为结合速率常数k_on和解离速率常数k_off的卷积。通常，观察该反应直到达到传感器表面的平衡覆盖为止，其覆盖由平衡解离常数K_d＝k_off/k_on确定。随后，使传感器表面暴露至无分析物的溶液，目的是监控仅解离反应，由此可以直接推导出k_off。

这种类型的生物传感具有许多缺点，特别是当目标分子是膜蛋白时。据估计，所有获批的药物靶标中约60％是膜蛋白。特别是对于膜蛋白，成功率低至约30％。

许多药物靶标，尤其是膜蛋白，与传感器表面的固定不相容。因此，必须对靶标进行消耗大量时间和资源的修饰。

由于信号幅度与固定的靶标的数量成正比，因此它们需要表面上的高密度的药物靶标。

这些系统仅能够检测表面的净变化。因此，它们无法看到平衡时的结合和解结合动力学。

这些传感器平台提供的传感器表面的数量非常有限。SPR系统通常具有3-4个独立的传感器表面。这意味着如果靶标出现故障，则传感器会“丢失”。除了传感器的成本外，该设备无法记录该特定表面的任何其他数据。这极大地限制了通量。

在开始新的运行之前，传感器表面必须不含任何测试化合物。对于驻留时间长的化合物，这可能造成困难，并且表面再生往往限制了通量。

灵敏度受到生物传感器平台的技术特性的限制。