[发明专利]一种装载靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌体、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种装载靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子的外泌体，其特征在于，所述靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子选自siRNA、shRNA、反义寡核苷酸药物、三链核酸、CpG寡核苷酸、Aptamer、microRNA中的一种或多种；

优选地，所述靶向酪氨酸酶基因的小核酸分子是siRNA或shRNA。

2.根据权利要求1所述的外泌体，其特征在于，所述外泌体包含靶向酪氨酸酶基因的siRNA，所述靶向酪氨酸酶基因的siRNA的序列如SEQ NO:1-SEQNO:6所示；

优选地，所述靶向酪氨酸酶基因的siRNA的序列如SEQ NO:4、SEQ NO:5所示。

3.根据权利要求1所述的外泌体，其特征在于，所述外泌体包含靶向酪氨酸酶基因的shRNA，所述靶向酪氨酸酶基因的shRNA的序列如SEQ NO:7-SEQ NO:12所示。

4.权利要求1所述的外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)设计合成可以有效沉默酪氨酸酶基因的siRNA，并感染细胞验证其效果；

(2)根据步骤(1)中的siRNA序列设计shRNA序列；

(3)将步骤(2)中得到的shRNA序列克隆至质粒表达载体，得到shRNA表达载体；

(4)将步骤(3)中得到的shRNA表达载体用慢病毒进行包装，得到shRNA慢病毒表达载体；

(5)用步骤(4)中得到的shRNA慢病毒表达载体感染间充质干细胞，收集阳性细胞培养液；

(6)从步骤(5)得到的阳性细胞培养液中提取外泌体。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述质粒表达载体为pLKO.1-puro质粒。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中所述间充质干细胞选自以下其中一种：脂肪来源间充质干细胞、脐带来源的间充质干细胞、骨髓来源间充质干细胞、牙髓来源间充质干细胞、诱导多能干细胞衍生的间充质干细胞。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(6)中采用总外泌体分离试剂提取外泌体。

8.权利要求1-3任一项所述的外泌体或权利要求4-7任一项所述的制备方法制得的外泌体在制备用于抑制黑色素生成的药物、化妆品或水光针中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，通过所述水光针将所述外泌体导入表皮深层和真皮层。