[发明专利]一种用于载玻片样品染色反应的清洗方法

说明书

本申请公开了一种用于载玻片样品染色反应的清洗方法，属于对载玻片上组织或细胞进行染色的改进的方法和装置技术领域，包括以下步骤：采用喷头产生多根平行束状排列的清洗试剂射流体，对载玻片的喷射区表面进行倾斜喷射，通过调整喷头高度、喷头与载玻片间的距离以及清洗试剂射流体的喷射角度和喷射速度，并经过一段缓冲距离，使流体汇集分布形成瀑布状流体，流经样品区表面对样品进行流动清洗，以去除前步反应剩余试剂。本申请清洗效率高、清洗试剂用量少且样品损失率低；通过调整压力或喷头参数，能够快速适应不同的清洗力度的要求；结构简单，占用空间少，能够适应多种安装场合，适宜推广使用。

技术领域

本申请涉及对载玻片上组织或细胞进行染色的改进的方法和装置技术领域，尤其是涉及一种用于载玻片样品染色反应的清洗方法。

背景技术

免疫组化是一种对载玻片上组织或细胞进行染色的技术，通过对组织或细胞的染色可以在显微镜下观察样本中组织和细胞的状态，以进行病症诊断。

通常免疫组化染色需要多种试剂在样本上逐步进行反应来实现样本的染色，为保证各反应试剂的顺利进行，在各反应试剂之间需要通过清洗步骤去除当前反应后多余的试剂，以保证下一步的试剂能够与被检测组织正常进行反应，从而保证染色的质量。

当前手工染色过程通常采用一种中间试剂(例如缓冲液)对反应试剂进行冲洗，采用倾倒缓冲液的方式去除当前步骤多余的反应试剂，能够保证清洗干净，但消耗的试剂量非常大，而且倾倒过程水流力度无法控制，常直接溅射到反应区，可能会破坏或冲走待测试组织或细胞。

而另一种通过仪器来自动化实现免疫组化的染色过程，如现有技术中样本反应试剂(包括清洗步骤使用的中间试剂)的清除是通过层流替换实现，具体是通过一侧加液一侧抽液的方式，使流体依靠毛细管力或沿斜坡依靠重力自行流动，流速较慢且需要重复清洗多次，其消耗的试剂量少，但其对反应试剂的清洗不够彻底，残留的反应试剂将导致染色结果质量下降。究其原因可能是因为流体流速过慢，无法在短时间内充分交换液体。

因此可认为，现有载玻片清洗方法在流体流速(即对样品的破坏性或称损失率)与清洗效率二者之间失衡，要么清洗效率高效果好、样品损失率较大，如离心清洗或手动倾倒清洗；要么样品损失率低、但清洗效率较低且清洗效果一般，如现有层流替换技术。本申请应运而生，试图提出一种清洗效率高、容易控制且不会对载玻片生物样品造成冲击或破坏的新型清洗工艺。

发明内容

本申请的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种用于载玻片样品染色反应的清洗方法。

本申请采用如下的技术方案：

一种用于载玻片样品染色反应的清洗方法，包括以下步骤：采用喷头产生多根平行束状排列的清洗试剂射流体，通过调整喷头高度、喷头与载玻片间的距离以及清洗试剂射流体的喷射角度和喷射速度，使清洗试剂射流体对载玻片样品区以外的表面区域进行倾斜喷射，产生散射和溅射，并经过一段缓冲距离，汇集分布后的流体流经样品区表面对样品进行流动清洗，以去除样品中的反应剩余试剂。

通过采用上述技术方案，试图通过密排孔喷射方式，使流体在玻璃表面形成加速的瀑布状流体，比完全依靠流体的自重流动产生的层流流速要快，从而达到提高现有层流替换清洗技术中清洗效率的目的。

现有技术中的层流替换，如专利ZL03817566.5可以理解为完全依靠流体的自重流动，或现有细胞层流洗涤机，则是在短距离内通过一侧抽液一侧吸液的方式造成细胞上方溶液的层流体，以实现溶剂稀释溶解替换的清洗方式，也较难应用在较宽的载玻片区域清洗。以上两种技术都等同于在较慢流速u₀的层流体下，对样品区进行清洗，其流速较慢，不会对样品区产生冲击和损坏，但其流速过慢，造成流经速度过慢，溶剂溶解交换速度较慢，故需要多次反复操作，对一些顽固性残留试剂往往无效，还需要采用离心清洗。

优选地，倾斜喷射具体是指清洗试剂射流体与载玻片上表面之间夹角范围为10-60°，夹角范围进一步优选为为32±5°。