[发明专利]一种肿瘤坏死因子α检测试剂、制备方法及其检测方法

权利要求书

1.一种肿瘤坏死因子α检测试剂，包括：R1试剂：生物素标记的肿瘤坏死因子α抗体1溶液、R2试剂：吖啶酯标记的肿瘤坏死因子α抗体2溶液、R3试剂：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，其特征在于所述的生物素标记的肿瘤坏死因子α抗体1和吖啶酯标记的肿瘤坏死因子α抗体2分别作用于肿瘤坏死因子α的不同表位，两个抗体中至少一个为单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的肿瘤坏死因子α检测试剂，其特征在于，所述的R1试剂浓度为0.3μg/mL-1.0μg/mL，R2试剂浓度为0.3μg/mL-1.0μg/mL，R3试剂含链霉亲和素包被的磁微粒0.2mg/mL-0.5mg/mL。

3.根据权利要求1所述的肿瘤坏死因子α检测试剂，其特征在于，所述的肿瘤坏死因子α抗体1和肿瘤坏死因子α抗体2优选两个抗体均为单克隆抗体。

4.根据权利要求1所述的肿瘤坏死因子α检测试剂，其特征在于，所述的检测试剂还包括校准品肿瘤坏死因子α溶液，浓度分别0pg/mL、2pg/mL、25pg/mL、50pg/mL、250pg/mL、500pg/mL、1000pg/mL。

5.根据权利要求4所述的肿瘤坏死因子α检测试剂，其特征在于所述的校准品肿瘤坏死因子α重组蛋白溶液的溶剂为0.05-0.1 M磷酸盐缓冲液，缓冲液含1% BSA、0.01%Proclin300 。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的肿瘤坏死因子α检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

R1试剂的制备：取肿瘤坏死因子α抗体1置于超滤离心管中，加入0.05M碳酸盐缓冲液，离心后液体弃去，将超滤管倒置于离心管中，加入0.05M碳酸盐缓冲液，离心后收集液体，按肿瘤坏死因子α抗体1和活化的生物素的质量比5:1-10:1的比例混合，室温避光放置2-4小时后置入透析袋中，将0.05M碳酸盐缓冲液置换为0.05-0.1 M的 PB缓冲液，将收集到的生物素标记肿瘤坏死因子α抗体1溶液选用标记保存液稀释至0.3μg/mL-1.0μg/mL；

R2试剂的制备：取肿瘤坏死因子α抗体2置于超滤离心管中，加入0.05M碳酸盐缓冲液，离心后液体弃去，将超滤管倒置于离心管中，加入0.05M碳酸盐缓冲液，离心后收集液体，按吖啶酯和肿瘤坏死因子α抗体2质量比0.1:1-0.3:1混合，充分混匀，室温避光放置2-4小时后置入透析袋中，将0.05M碳酸盐缓冲液置换为0.05-0.1 M的 PB缓冲液，将收集到的吖啶酯标记肿瘤坏死因子α抗体2溶液选用标记保存液稀释至0.3μg/mL-1.0μg/mL；

R3试剂的制备：用磁微粒保存液稀释预售的链霉亲和素的磁微粒至链霉亲和素包被的磁微粒0.2mg/mL-0.5mg/mL。

7.根据权利要求6所述的肿瘤坏死因子α检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的标记保存液为0.05-0.1 M磷酸盐缓冲液含1% BSA、0.01% Proclin300 ，所述的R3试剂含0.1%氯乙酰胺和0.1%牛血清蛋白。

8.根据权利要求6所述的肿瘤坏死因子α检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的磁微粒保存液为0.05-0.1 M的HEPES缓冲液，所述的HEPES缓冲液含0.1% BSA、0.01%Proclin300、0.1%氯乙酰胺。