[发明专利]一种长链非编码RNA RP11-732M18.3的检测方法及其应用

说明书

本发明提供了一种长链非编码RNA RP11‑732M18.3检测方法及其应用，属于分子生物医学技术领域。本发明的长链非编码RNA RP11‑732M18.3的检测方法为提取样本中的RNA，进行RNA逆转录反应，得cDNA进行实时荧光定量PCR反应，检测长链非编码RNA RP11‑732M18.3的表达。本发明通过对血清中RNA进行提取检测，操作简便易行，检测特异性高、灵敏度高，经济快速；本发明利用高保真M‑MLV酶，通过对引物的设计，使长链非编码RNA RP11‑732M18.3的检测达到高灵敏度和特异性的目的。

技术领域

本发明属于分子生物医学技术领域，具体涉及一种长链非编码RNA RP11-732M18.3检测方法及其应用。

背景技术

脑和其他神经系统肿瘤是40岁以下男性和20岁以下女性癌症死亡第一大原因。胶质瘤占颅内原发恶性肿瘤的80％，是对人类最具攻击性的癌症之一，包括胶质母细胞瘤和世界卫生组织的II级和III级肿瘤(低级别胶质瘤)，具有恶性比例高、复发率高和预后差的特点。近年来，中国脑胶质瘤患病率逐年上升，年增长率高达1.2％。随着现代显微神经外科技术及术中导航等辅助技术的飞速发展、分子病理学检测技术的应用，临床疗效有所提高，但是由于胶质瘤细胞高增殖性和侵袭性，部分患者肿瘤进展快，其中胶质母细胞瘤患者5年生存率仅为17.19％。因此，胶质瘤进展快、预后差是一直困扰临床的难题。目前胶质瘤诊断依赖MRI等影像检查，具有伤害大、费用高、患者医从性低等不足，患者就诊时往往处于晚期。寻找新的、易检测早期诊断标志物对提高治疗效果和改善患者生存质量具有重要临床应用价值。

lncRNA是一类不具备蛋白编码能力的长度大于200nt的RNA。lncRNA起初被认为是基因组转录的“噪音”，是RNA聚合酶II转录的副产物，不具有生物学功能。然而，近年来的研究表明，lncRNA通过trans(反式)或cis(顺式)作用方式影响靶蛋白功能，调控细胞增殖、迁移、周期、凋亡等功能，影响胶质瘤的发生发展和预后。近年来研究指出，外周血中循环lncRNA可作为肿瘤标志物。但是目前尚无lncRNA应用过于胶质瘤的诊断。通过对人胶质瘤标本进行lncRNA芯片检测，发现lncRNA RP11-732M18.3在胶质瘤组织中表达升高(2.53-fold change,p.05)。目前检测血清中lncRNA的方法主要分成三大类：1)一步法：标本提取RNA后，特异性引物PCR扩增检测；2)两步法：第一步是逆转录RNA，将RNA逆转录为cDNA，第二步是PCR定量；3)三步法：提取RNA，逆转录成，利用引物扩增特异片段，最后琼脂糖电泳，可以做到目的片段定性和半定量。

目前lncRNA的PCR方法存在特异性差、半定量、灵敏度低等不足。目前尚无血清检测lncRNA RP11-732M18.3的方法。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种长链非编码RNA RP11-732M18.3检测方法及其应用，解决目前lncRNA采用PCR检测方法存在的特异性差、半定量、灵敏度低灯问题。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种长链非编码RNA RP11-732M18.3的检测方法，所述的检测方法为提取样本中的RNA，进行RNA逆转录反应，得cDNA进行实时荧光定量PCR反应，检测长链非编码RNA RP11-732M18.3的表达。研究表明，长链非编码RNARP11-732M18.3在胶质瘤组织中表达升高(2.53-fold change,p.05)。但目前尚无检测血清中长链非编码RNA RP11-732M18.3的方法。本申请发明人经过大量的实验发现，采用上述方法能够准确的检测血清中的长链非编码RNA RP11-732M18.3，且灵敏度高、特异性好。

作为本发明所述的长链非编码RNA RP11-732M18.3的检测方法的优选实施方式，所述逆转录反应的特异性引物的核苷酸序列如SEQID NO:1所示。本申请发明人设计逆转录反应的特异性引物，能够提高长链非编码RNA RP11-732M18.3的检测的灵敏度和特异性。