[发明专利]RNF20基因在制备无精子症的治疗药物中的应用及治疗药物

说明书

本发明涉及RNF20基因在制备因RNF20基因突变导致的无精子症的治疗药物中的应用，以及治疗药物。本发明通过将RNF20基因表达载体经显微注射和电转的方式导入到小鼠睾丸组织中，挽救了RNF20基因缺失的幼鼠的非梗阻性无精子症。进一步的，通过在显微注射物中加入自噬抑制剂，挽救了RNF20基因缺失的成年小鼠的非梗阻性无精子症。

技术领域

本发明涉及生殖医学领域，更特别地，涉及RNF20基因在制备无精子症的治疗药物中的应用及治疗药物

背景技术

男性不育疾病是困扰一些人群的世界性问题。由于医疗技术的突飞猛进，一些男性不育疾病带来的生育障碍可通过辅助繁殖技术(ART)来克服。但是非梗阻无精症(non-obstruct ive azoospermi a，NOA)患者由于不能产生有功能单倍体生殖细胞，因此，现有的ART无法解决NOA患者的生育问题。

一些NOA是因为基因突变造成的，理论上，可将正常功能基因递送到精母细胞或精细胞中，使这些细胞恢复正常功能，从而解决NOA患者的生育问题。我们的前期研究发现，一些NOA与基因Rnf20的突变有关。

在伦理上，外源DNA整合到人体生殖细胞中是不被允许的，因此，需要一种能够使NOA患者的生殖细胞恢复功能但是又不会把外源DNA遗传下去的方法。已经有研究表明，使用一些表达质粒(例如质粒pCAG)可将目的基因导入到细胞中进行表达，但是不会使目的基因整合到染色体上。这为我们治疗NOA提供了一种可行的思路。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了RNF20基因在制备因RNF20基因突变导致的无精子症的治疗药物中的应用。

在一个具体实施方案中，所述RNF20基因编码的氨基酸序列如SEQ I DNO:1所示。

在一个具体实施方案中，所述RNF20基因的核酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明还提供了一种用于因RNF20基因突变导致的无精子症的治疗药物，包括RNF20基因表达载体。

在一个具体实施方案中，所述RNF20基因表达载体为不整合到染色体上的表达载体，并且所述表达载体的启动子为可在睾丸组织中表达的启动子。

在一个具体实施方案中，所述表达载体为以pCAG质粒或pCS2⁺质粒为骨架改造的重组质粒。

在一个具体实施方案中，所述表达载体的浓度为7μg/μL。

在一个具体实施方案中，所述治疗药物还包括自噬抑制剂。

在一个具体实施方案中，所述自噬抑制剂为3-甲基腺嘌呤。

在一个具体实施方案中，所述自噬抑制剂的浓度为3mM。

附图说明

图1为显微注射并电转pCS2⁺-RNF20的小鼠的睾丸组织中的MYC-RNF20表达情况，其中A为曲细精管内注射的小鼠和曲细精管间注射的小鼠的睾丸组织中的MYC-RNF20表达的免疫印迹照片；B为术后不同时间的睾丸组织提取物中的MYC-RNF20表达的免疫印迹照片。

图2为用pCS2+-RNF20质粒对4周龄Stra8-Rnf20^-/-小鼠进行曲细精管内显微注射并电转的挽救实验结果，其中，A为分组示意图，B-G为术后各组小鼠的表型，其中B为曲细精管组织的HE染色照片，C为尾部附睾组织的HE染色照片，D为空管率统计图，E为睾丸照片，F为精子浓度，G为精子显微照片。