[发明专利]肿瘤细胞、内质网逐级靶向纳米乳剂及其制备方法

权利要求书

1.一种肿瘤细胞、内质网逐级靶向纳米乳剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法步骤如下：

(1)以聚乙二醇和2-十六烷基十八烷酸为原料，以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为缩合剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，以二氯甲烷做溶剂，室温搅拌反应24～48小时，然后旋蒸除去二氯甲烷，加入超纯水分散，转移至透析袋中，于超纯水中透析三天，8000转/分钟离心10分钟，取上清冷冻干燥得到聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶联物；

(2)以聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶联物和D-生物素为原料，以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为缩合剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，在二氯甲烷中室温搅拌反应24～48小时，然后旋蒸除去二氯甲烷，加入超纯水分散，转移至透析袋中，于超纯水中透析三天，8000转/分钟离心10分钟，取上清冷冻干燥，即可得到生物素修饰的聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶联物；

(3)以二氢卟吩e6和N-对甲苯磺酰基乙二胺为原料，以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为缩合剂，4-二甲氨基吡啶为催化剂，以N,N-二甲基甲酰胺做溶剂，室温搅拌反应24～48小时，然后于超纯水中透析三天，8000转/分钟离心10分钟，取沉淀冷冻干燥，即可得到N-对甲苯磺酰基乙二胺-二氢卟吩e6偶联物；

(4)将生物素修饰的聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶联物和N-对甲苯磺酰基乙二胺-二氢卟吩e6偶联物加入至甲醇中，加热至40℃搅拌30分钟溶解，然后旋蒸除去甲醇，加入超纯水，超声分散5分钟，加入全氟辛烷，于冰水浴中超声破碎，通入氧气，即可得到同时负载有N-对甲苯磺酰基乙二胺-二氢卟吩e6偶联物和氧气的纳米乳剂。

2.根据权利要求1所述的纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的聚乙二醇、2-十六烷基十八烷酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶摩尔比为1:1:5～10:0.5～2。

3.根据权利要求1所述的纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶联物、D-生物素、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶摩尔比为1:1～2:5～10:0.5～2。

4.根据权利要求1所述的纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述二氢卟吩e6、N-对甲苯磺酰基乙二胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1:5～10:1～2。

5.根据权利要求1所述的纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述生物素修饰的聚乙二醇-2-十六烷基十八烷酸偶联物、N-对甲苯磺酰基乙二胺-二氢卟吩e6偶联物、超纯水、全氟辛烷质量比为10:0.5～2:500～2000:100～200。

6.根据权利要求1所述的纳米乳剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述所述超声破碎功率为30W～60W、时间为5～10分钟，氧气流量为1升/分钟，通入时间为2～5分钟。

7.根据权利要求1-6任一项所述方法制备的肿瘤细胞、内质网逐级靶向纳米乳剂，其特征在于，所述纳米乳剂水合直径为100～300nm。

8.根据权利要求7所述的肿瘤细胞、内质网逐级靶向纳米乳剂，其特征在于，所述纳米乳剂具有酯酶响应性释放N-对甲苯磺酰基乙二胺-二氢卟吩e6偶联物和肿瘤细胞、内质网逐级靶向的性质。