[发明专利]一种新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统的制备方法，其特征在于：所述制备方法是通过如下步骤实现的：

步骤一：合成普鲁士蓝纳米酶；

步骤二：将步骤一中合成后的普鲁士蓝纳米酶进行酸化，制得中空结构的普鲁士蓝纳米酶；

步骤三：将步骤二中所得的中空结构的普鲁士蓝纳米酶作为载体搭载葡萄糖氧化酶，形成新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统；

步骤四：使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测量步骤三中新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统内的葡萄糖氧化酶含量，计算中空的普鲁士蓝中葡萄糖氧化酶的负载量，基于中空的普鲁士蓝中葡萄糖氧化酶的负载量，判断新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统中葡萄糖氧化酶的最大含量。

2.根据权利要求1所述的一种新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统的制备方法，其特征在于：所述步骤一中合成普鲁士蓝纳米酶的具体步骤是通过以下步骤实现的：

步骤一一：称取1g聚乙烯吡咯烷酮，32mg铁氰化钾放置在烧杯中，再加入20mL浓度为0.01M的盐酸溶液，利用磁力搅拌器搅拌成混合液，搅拌时间为4h；

步骤一二：将步骤一一中所得的混合液置于反应釜中，并将带有混合液的反应釜放入烘箱，加热温度为80℃，反应时间为24h，使混合液在反应釜中充分反应；

步骤一三：将步骤一二中反应后的混合液从反应釜中取出并冷却至室温后，将冷却后的混合液进行离心处理，离心转速为12000rpm，离心时间为15min；

步骤一四：提取步骤一三中经过离心处理后混合液的上清液，经水洗离心两次，乙醇洗离心一次，获得普鲁士蓝纳米酶溶液。

3.根据权利要求2所述的一种新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统的制备方法，其特征在于：所述步骤二中制得中空结构的普鲁士蓝纳米酶的具体步骤是通过以下步骤实现的；

步骤二一：将步骤一中所得的普鲁士蓝纳米酶溶液稀释后备用；

步骤二二：称取20mg步骤二一中所得的稀释溶液、100mg聚乙烯吡咯烷酮与0.1M的盐酸组成20mL的混合液，并将混合液置于磁力搅拌器上搅拌4h；

步骤二三：将步骤二二中所得的混合液装入反应釜中，并将带有混合液的反应釜放入烘箱，加热温度为140℃，反应时间为4h，使混合液在反应釜中充分反应；

步骤二四：将步骤二三中反应后的混合液从反应釜中取出并冷却至室温后，将冷却后的混合液进行离心处理，离心转速为12000rpm，离心时间为15min；

步骤二五：提取步骤二四中经过离心处理后混合液的上清液，经水洗离心两次，乙醇洗离心一次，获得中空的普鲁士蓝溶液溶液。

4.根据权利要求3所述的一种新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统的制备方法，其特征在于：所述步骤三中制得新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统具体是通过以下步骤实现的：

步骤三一：取步骤二中所得的2.5mg中空的普鲁士蓝纳米酶放于5个样品管，每个样品管中各500μg；

步骤三二：将10mg葡萄糖氧化酶溶解于1mL水中，制备出10mg/mL的葡萄糖氧化酶溶液，分别取25μL、50μL、75μL、100μL、150μL的葡萄糖氧化酶溶液加入到步骤三一中的5个样品管内，使得5个样品管中的葡萄糖氧化酶含量分别为250μg、500μg、750μg、1000μg和1500μg；

步骤三三：向步骤三二中每个样品管内加入等量的蒸馏水，并将加入蒸馏水后的样品管放置在磁力搅拌器上，搅拌12h；

步骤三四：将步骤三三中搅拌完成的样品装入离心管中进行离心处理，离心转速为12000rpm，离心时间为15min；

步骤三五：提取步骤三四中经过离心处理后混合液的上清液，得到新型普鲁士蓝纳米酶双酶系统。