[发明专利]一种基于胆固醇修饰的脂质立方相核酸结晶方法在审

专利信息
申请号: 202211347378.X 申请日: 2022-10-31
公开(公告)号: CN115521934A 公开(公告)日: 2022-12-27
发明(设计)人: 孔华庭;孙波;汪启胜;郁峰;徐琴 申请(专利权)人: 中国科学院上海高等研究院
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C30B29/54;G01N23/20
代理公司: 上海智信专利代理有限公司 31002 代理人: 余永莉
地址: 201210 上海市*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 基于 胆固醇 修饰 立方 核酸 结晶 方法
【权利要求书】:

1.一种基于胆固醇修饰的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:

1)使用胆固醇修饰核酸,制备得到胆固醇修饰的核酸结构;

2)将所述胆固醇修饰的核酸结构与脂质混合,制备得到核酸结构脂质立方相;

3)将所述核酸结构脂质立方相点样到结晶板孔内,覆盖结晶试剂;

4)将步骤3)得到的结晶板放置于晶体培养室中避光培养,观察结晶情况;

5)捞取晶体,收集X射线衍射数据。

2.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤1)中所述核酸为DNA或RNA。

3.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤1)中所采用的核酸包括:单链核酸、双链核酸、核酸适配体、核酸四面体、球形核酸、核酸纳米结构。

4.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤2)中所述脂质为单油酸甘油酯B,脂质β-XylOC16+4或脂质phytantriol,还可进一步添加天然脂质,包括胆固醇、磷脂酰胆碱。

5.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤1)中核酸的浓度为0.1~10mg/mL,步骤2)中脂质与胆固醇修饰的核酸结构混合二者之间的重量比为(1~2)∶1。

6.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤2)中所采用的混合方法包括:离心法、挥发法以及注射器混合法。

7.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤3)中所采用的点样方法为移液枪法、微量注射器法或点样机器人法。

8.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤3)中所述结晶试剂为结晶条件筛选试剂盒中的试剂,或者配制的结晶条件试剂。

9.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤4)中所采用的培养温度为4~25℃。

10.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤5)中用于收集X射线衍射数据的装置为台式X射线衍射仪或同步辐射X射线晶体学线站。

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