[发明专利]一种基于胆固醇修饰的脂质立方相核酸结晶方法在审
| 申请号: | 202211347378.X | 申请日: | 2022-10-31 |
| 公开(公告)号: | CN115521934A | 公开(公告)日: | 2022-12-27 |
| 发明(设计)人: | 孔华庭;孙波;汪启胜;郁峰;徐琴 | 申请(专利权)人: | 中国科学院上海高等研究院 |
| 主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C30B29/54;G01N23/20 |
| 代理公司: | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人: | 余永莉 |
| 地址: | 201210 上海市*** | 国省代码: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 基于 胆固醇 修饰 立方 核酸 结晶 方法 | ||
1.一种基于胆固醇修饰的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:
1)使用胆固醇修饰核酸,制备得到胆固醇修饰的核酸结构;
2)将所述胆固醇修饰的核酸结构与脂质混合,制备得到核酸结构脂质立方相;
3)将所述核酸结构脂质立方相点样到结晶板孔内,覆盖结晶试剂;
4)将步骤3)得到的结晶板放置于晶体培养室中避光培养,观察结晶情况;
5)捞取晶体,收集X射线衍射数据。
2.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤1)中所述核酸为DNA或RNA。
3.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤1)中所采用的核酸包括:单链核酸、双链核酸、核酸适配体、核酸四面体、球形核酸、核酸纳米结构。
4.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤2)中所述脂质为单油酸甘油酯B,脂质β-XylOC16+4或脂质phytantriol,还可进一步添加天然脂质,包括胆固醇、磷脂酰胆碱。
5.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤1)中核酸的浓度为0.1~10mg/mL,步骤2)中脂质与胆固醇修饰的核酸结构混合二者之间的重量比为(1~2)∶1。
6.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤2)中所采用的混合方法包括:离心法、挥发法以及注射器混合法。
7.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤3)中所采用的点样方法为移液枪法、微量注射器法或点样机器人法。
8.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤3)中所述结晶试剂为结晶条件筛选试剂盒中的试剂,或者配制的结晶条件试剂。
9.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤4)中所采用的培养温度为4~25℃。
10.根据权利要求1所述的脂质立方相核酸结晶方法,其特征在于,步骤5)中用于收集X射线衍射数据的装置为台式X射线衍射仪或同步辐射X射线晶体学线站。
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