[发明专利]用于检测犬瘟热病毒抗体的侧向层析系统及其制备方法

说明书

本发明提供一种“用于检测犬瘟热病毒抗体的侧向层析系统及其制备方法，属于生物检测领域，其特征在于，包括：结合垫和检测线；所述结合垫上涂覆有胶体碳与人工结合抗原的非共价偶联混合物；所述检测线上包被有人工结合抗原；所述人工结合抗原的氨基酸序列如Seq ID No.2所示，本发明提供的试纸条具有灵敏度高，快速简便，而且耗时短等优点，适用于现场快速检测，为现场免疫犬群抗体监测提供了一种简便的血清学检测方法。

技术领域

本发明属于生物分析技术领域，具体涉及用于检测犬瘟热病毒抗体的侧向层析系统及其制备方法。

背景技术

犬瘟热(canine distemper)是由犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)感染引起多种动物共患、多系统感染性的高度接触性传染病。随着人口的增加和野生动物栖息地的扩展，物种间的相互联系也在增加，CDV的宿主范围不断扩大，已经由传统的犬科、鼬科、浣熊科扩展到了灵长目的猴科、偶蹄目的西猯科以及食肉目等多种动物，对养殖业和野生动物保护造成了巨大的损失。预防CDV，对于保护野生动物、减少养殖户损失都非常重要。犬和经济动物主要是用弱毒疫苗预防CDV。监测幼犬或免疫犬CDV抗体水平，将有助于确定新生幼犬首次免疫时机和评估免疫效果。血清中和试验(SN)检测CDV抗体费时费力，操作复杂；酶联免疫吸附试验(ELISA)虽然敏感、特异，但需要特殊仪器，不适合对宠物临床少量或单份血清样品的随时检测。

国内宠物医院虽然有进口试剂盒可用于检测CDV抗体，但检测费用较高，制约了在免疫接种前对犬CDV抗体的监测，多数犬的免疫程序仍然是凭经验而定，缺少抗体检测依据。

免疫层析分析方法具有操作简便、成本低廉、适用于大量样本等优势，近年来在现场快速检验领域(POCT)有着广泛的应用。胶体金具有生物兼容性好，不同粒径可呈现不同的颜色，易于通过改性提高信号强度等优势，成为免疫层析分析方法中最常用的标记材料。但是胶体金价格昂贵，批间差异大，对抗体、包被原等材料的要求比较高，且信号较弱，限制了其应用。

做为胶体金的替代产品，胶体碳是一种纳米材料，经特殊活化处理后具有良好的生物相容性。作为标记物，在稳定性、检测线性范围、有效期、对全血样本的耐受性、环保、低成本等方面都超越了胶体金。

理论上任何蛋白都可与胶体金或胶体碳非共价偶联制得可用的检测试纸条，但在实际产品开发过程中，由于特定的蛋白结构/构象，胶体碳颗粒与蛋白之间非共价偶联的浓度配比、包被浓度以及喷涂量等因素制约，目前市面上尚不存在一款可用的有效的检测CDV抗体的胶体碳试纸条产品。

因此，亟需开发一款检测效果好的CDV抗体检测胶体碳试纸条。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种用于检测犬瘟病毒抗体的试纸条及其制备方法。胶体碳免疫层析法快速检测犬瘟热病毒抗体技术是建立在胶体碳与抗原抗体特异性结合的层析技术基础上的一种技术。

本发明基于对CDV基因组编码的6种结构蛋白，即N-P-M-F-H-L蛋白的结构分析，选出了其中血凝素蛋白H-即犬瘟热病毒蛋白H作为结合抗原的原型，根据该犬瘟热病毒蛋白H的特殊构象，选出其中截短片段作为人工结合抗原，调配出最优的结合抗原与胶体碳颗粒非共价偶联的配比浓度、非共价偶联结合物的稀释浓度、包被浓度及喷涂量，制得的胶体碳试纸条具有灵敏度高，快速简便，而且耗时短等优点，适用于现场快速检测。为现场免疫犬群抗体监测提供了一种简便的血清学检测方法。

具体方案如下：

本发明提供一种用于检测犬瘟热病毒抗体的侧向层析系统，其特征在于，包括：结合垫和检测线；

所述结合垫上涂覆有胶体碳与人工结合抗原的非共价偶联混合物；

所述检测线上包被有人工结合抗原；

所述人工结合抗原的氨基酸序列如Seq ID No.2所示。