[发明专利]一种发酵混合物中聚酮类化合物高效初分离方法

说明书

本发明提供一种发酵混合物中聚酮类化合物高效初分离方法，涉及发酵的技术领域，包括以下步骤：S1发酵，将黑曲霉菌种进行发酵培养得到发酵物；S2分离，得到的固体发酵物后，切成碎块，加入乙醇提取一次，收集提取液。

技术领域

本发明涉及发酵的技术领域，具体而言，涉及一种发酵混合物中聚酮类化合物高效初分离方法。

背景技术

黑曲霉为曲霉属(Aspergillus)的真菌，其代谢产物较为丰富，但主要是聚酮类化合物位置，包括萘并-γ-吡喃酮(naphto-γ-pyrones)和α-吡喃酮 (α-pyrones)等[28]。黑曲霉次生代谢产物生物活性广泛，包括细胞毒[29]、Tap DNA聚合酶抑制[30]、抗HIV[31]、NFRD抑制[32]和抗糖尿病[33]等。

现有技术中从黑曲霉中获取了一定数量的次生代谢产物，但该类数量并不全面，通过全基因组分析发现，黑曲霉共有55个基因簇可编译聚酮类次生代谢产物的合成，而过去发表的化合物仅仅是其中少于30％的基因簇调控产生，由此可见黑曲霉中尚有很多调控萘并-γ-吡喃酮类化合物合成的基因处于沉默状态，而次生代谢产物(萘并-γ-吡喃酮类化合物)的具有较高的药用价值，因此有必要提供一种能够使黑曲霉产生更多次生代谢产物的培养方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种发酵混合物中聚酮类化合物高效初分离方法，用以实现提高产更多类型的次生代谢产物(萘并-γ-吡喃酮类化合物)的技术效果。

本发明通过以下技术方案实现：

S1发酵

将黑曲霉菌种进行发酵培养得到发酵物；

所述步骤S1发酵中的具体操作方法如下：

将大米、烟酰胺和水浸泡，浸泡时间为12小时，温度为30℃；

浸泡后在121℃条件下进行灭菌30分钟，放置冷却，向其加入黑曲霉PDB 培养菌液进行发酵培养，培养条件：温度为25-35℃，培养时间为25-35天，得到固体发酵物待用；

S2分离，

得到的固体发酵物后，切成碎块，加入乙醇提取一次，收集提取液，残渣再拿乙醇提取一次，收集提取液并合并两次提取液，再进入蒸馏环节回收乙醇，剩下的残余物，即目标物的混合物用乙酸乙酯萃取1次，回收乙酸乙酯，滤液再用乙酸乙酯萃取2次，得到产物。

本发明的有益效果是：本申请和常规的乙醇的循环萃取技术不同，因为常规的乙醇循环提取的对象是固体，相对简单。此处S2中分离的是液体，因此需要采用本申请方案中的对乙酸乙酯被液体稀释，降低循环提取的难度。

具体实施方式

S1发酵

将黑曲霉菌种进行发酵培养得到发酵物；

所述步骤S1发酵中的具体操作方法如下：

将大米、烟酰胺和水浸泡，浸泡时间为12小时，温度为30℃；

浸泡后在121℃条件下进行灭菌30分钟，放置冷却，向其加入黑曲霉PDB 培养菌液进行发酵培养，培养条件：温度为25-35℃，培养时间为25-35天，得到固体发酵物待用；

S2分离，

得到的固体发酵物后，切成碎块，加入乙醇提取一次，收集提取液，残渣再拿乙醇提取一次，收集提取液并合并两次提取液，再进入蒸馏环节回收乙醇，剩下的残余物，即目标物的混合物用乙酸乙酯萃取1次，回收乙酸乙酯，滤液再用乙酸乙酯萃取2次，得到产物。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。