[发明专利]一种利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法在审
| 申请号： | 202211277914.3 | 申请日： | 2022-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN115558627A | 公开（公告）日： | 2023-01-03 |
| 发明（设计）人： | 李玉芹;任站;贾权威;陈赛兰;罗媛媛 | 申请（专利权）人： | 湘潭大学 |
| 主分类号： | C12N1/36 | 分类号： | C12N1/36;C12N1/38;C12P7/6463;C12R1/89 |
| 代理公司： | 湘潭市汇智专利事务所(普通合伙) 43108 | 代理人： | 冷玉萍 |
| 地址： | 411105 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 碳酸 强化 微藻固碳 路径 提高 效率 方法 | ||
1.一种利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以10-50mmol/L的低浓度碳酸氢盐驯化培养微藻株获得低浓度碳酸氢盐适应性种子液；(2)将步骤(1)所得驯化微藻种子液接入以100-200mmol/L的中浓度碳酸氢盐为唯一碳源的培养体系调控强化微藻C4固碳路径，提升胞内脂质含量。
2.根据权利要求1所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，所述的碳酸氢盐为碳酸氢钠或碳酸氢钾。
3.根据权利要求1所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，所述的微藻株为具备C4固碳路径的藻种属。
4.根据权利要求1所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，所述的微藻株为三角褐指藻Phaeodactylum Tricornutum。
5.根据权利要求1所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，所述的低浓度碳酸氢盐驯化培养微藻株具体为：以常规无菌操作平板划线法活化微藻株，挑取单克隆微藻，于含有10-50mmol/L的低浓度碳酸氢盐的f/2培养基中培养数天，后转入新鲜f/2培养基中并隔天滴加低浓度碳酸氢盐培养数天，获得低浓度碳酸氢盐适应性微藻株种子液。
6.根据权利要求1所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，所述的以100-200mmol/L的中浓度碳酸氢盐为唯一碳源调控强化微藻C4固碳路径具体为：将低浓度碳酸氢盐驯化的微藻株种子液接入以中浓度碳酸氢盐为唯一碳源的f/2培养体系中诱导数天。
7.根据权利要求1至6任一项所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，还包括步骤(3)，解析微藻C4固碳路径调控酶酶活与胞内脂质含量相关性，确定强化C4固碳路径对积脂效率的提高作用。
8.根据权利要求7所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，所述的步骤(3)具体为：收集中浓度碳酸氢盐诱导藻株细胞，经离心、洗涤、超声破壁后，以比色定量试剂盒法测定上清液C4固碳路径调控酶酶活；离心收集中浓度碳酸氢盐诱导藻细胞，经冻干、有机试剂抽提、真空干燥获得胞内总脂重量，以细胞干重法计算得胞内总脂含量；将C4固碳路径调控酶酶活与胞内脂质含量数据分别输入IBM SPSSStatistics 26.0或Origin 9.0或Excel软件进行相关性分析，确定微藻株C4固碳路径强化对提高脂质合成积累效率的作用。
9.根据权利要求8所述的利用碳酸氢盐强化微藻固碳路径提高积脂效率的方法，其特征在于，所述的C4固碳路径调控酶包括碳酸酐酶、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸磷酸二激酶、NAD-苹果酸脱氢酶和NAD-苹果酸酶。
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