[发明专利]一种用于痕量毒品检测的人体毛发裂解液及其应用

说明书

本发明公开了一种用于痕量毒品检测的人体毛发裂解液及其应用，属于毒品检测技术领域，包括以下组分：0.8‑1.5mg/mL蛋白酶，0.5％‑1.2％乙酸，2.6‑7.8mg/mL亚硫酸氢钠，2.9‑4.1mg/mL氯化钠，12.5‑20mg/mL三(2‑羧乙基)膦，0.5‑1.5％异丙醇，0.5‑1.5％聚乙二醇和pH4‑7弱酸性缓冲液，其中，％为体积百分比，本发明通过改变介质环境，降低了毒品分子与角蛋白之间的相互作用力，促进毒品从角蛋白中释放出来，进入裂解液介质，提高药物的释放量，从而增加后续检测准确度。

技术领域

本发明涉及毒品检测技术领域，具体涉及一种用于痕量毒品检测的人体毛发裂解液及其应用。

背景技术

据统计，我国吸食新型毒品的人数每年增长30％左右，其中青少年占了86％。新型毒品的滥用造成了严重的个体危害和社会危害，为了有效打击新型毒品犯罪，紧密配合公安等执法部门的禁毒需要，分析工作者们建立了一系列准确、快速、高灵敏的定性定量分析检测新型毒品的方法。而毛发作为毒品的一个特殊载体，具有其他检材不可比拟的优势，取材容易，携带方便，易长期保存且毒品在毛发中代谢较慢可长期存在，因此毛发中毒品的分析已成为法庭科学和临床分析的研究热点，发挥着越来越重要的作用。毛发中的毒品主要位于毛发的角质层和髓质层内，和蛋白质结合在一起，因此在检验毛发中的毒品之前需要对毛发样品进行前处理，将毒品从毛发中释放出来，同时也要消除毛发外部的油脂、汗液以及各种污染物。

现有技术中，对毛发处理的方法分为酸处理法和碱处理法，碱处理法例如专利CN110208072 B公开的由碱性蛋白酶、巯基乙酸、甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、氯化钠氢氧化钠缓冲液、聚乙二醇辛基苯基醚和二硫苏糖醇组成的快速毛发裂解液，其中，碱性蛋白酶用于在碱性条件下水解蛋白质肽键，分解角蛋白，释放出毒品小分子；巯基乙酸、二硫苏糖醇作为还原剂对提高角蛋白酶的活性具有促进作用；甘氨酸、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液、氯化钠氢氧化钠缓冲液等提供合适的裂解环境；聚乙二醇辛基苯基醚用于溶解脂质，以增加细胞膜对抗体的通透性。以含巯基的化合物作为还原剂时，含巯基的还原剂有一定的毒性，伴随着异味，为了保证二硫键的破坏程度，含单巯基的还原剂通常需要过量，含双巯基还原性化合物例如二硫苏糖醇(dithiothreitol，DTT)，还原效果好，但存在在溶液中难以保存的缺点，为了保证效果，DTT最好是现配现用。酸性条件下，常用的裂解还原为物为含磷的化合物，例如三(2-羧乙基)膦(Tris(2-carboxyethyl)phosphine，TECP，微溶于水，易于保存并且可以在无保护气体的条件下进行操作)，对二硫键的还原能力强于DTT，pH耐受范围广。专利CN 101979428 B公开了一种动物毛发溶解剂及角蛋白溶液的制备方法和用途，以三(2-羧乙基)膦盐酸盐、三(2-氰乙基)膦或三正丁基膦为主成分，用于分离角蛋白。

在酸性乃至中性的条件下，存在药物释放不完全的问题，而毛发中毒品及其代谢物的含量很低，仅为ng/mg级，药物释放不完全将会影响检测准确度。

发明内容

针对上述存在的技术不足，本发明的目的是提供一种用于痕量毒品检测的人体毛发裂解液，其特征在于，包括以下组分：0.8-1.5mg/mL蛋白酶，0.5-1.2％乙酸，2.6-7.8mg/mL亚硫酸氢钠，2.9-4.1mg/mL氯化钠，12.5-20mg/mL三(2-羧乙基)膦，0.5-1.5％异丙醇，0.5-1.5％聚乙二醇和pH4-7弱酸性缓冲液，其中，％为体积百分比。

优选地，包括以下组分：0.9-1.1mg/mL蛋白酶，0.7-1.0％乙酸，3.6-4.2mg/mL亚硫酸氢钠，3.5-4.1mg/mL氯化钠，16.6-18.7mg/mL三(2-羧乙基)膦，1.1-1.5％异丙醇，1.1-1.5％聚乙二醇和pH4-7弱酸性缓冲液，其中，％为体积百分比。优选地，所述pH4-7弱酸性缓冲液为0.01-1mol/L的磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中的至少一种，缓冲液为角蛋白催化分解，毛发表面处理提供适宜的环境，酸性条件下，有助于毛发表面油脂分解，酸性条件下，有效避免了进入裂解液的药物与蛋白质再次进行结合。