[发明专利]一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒

说明书

本发明公开了一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，包括以下组分：裂解液、磁珠、蛋白酶k溶液、清洗液I、清洗液II、洗脱液。本发明通过试剂配方的优化，提高了全血基因组DNA的提取效率。本发明将裂解液与蛋白酶k溶液加在同一孔位中，盐酸胍、异硫氰酸胍等在裂解血液蛋白结构的同时，结合液异丙醇沉淀基因组DNA，使基因组DNA快速的吸附在磁珠上。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒。

背景技术

在分子生物学实验中，核酸提取是一项最基本且最重要的环节，核酸提取的产量、纯度及完整性直接关系到下游核酸检测、生物学研究或其他新产品开发的成败。磁珠法核酸提取方法是指以超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠(以下简称磁珠)为载体，通过磁珠在高盐溶液中吸附核酸，经过磁性分离和漂洗杂质后，在低盐溶液中核酸从磁珠表面解吸附的原理进行核酸提取的方法。该方法不需离心，操作简单，便于高通量、自动化操作，可以使核酸提取效率显著升高，已成为目前新兴的核酸提取技术。

目前基因组DNA提取纯化的方法有很多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法等，但上述方法存在提取试剂有毒，操作繁琐，易导致污染等问题，而磁珠法不使用有毒试剂，操作简单，不易污染，已经成为目前分子生物学和临床检验医学研究的理想方法。

但是现有磁珠法基因组DNA提取试剂盒对全血基因组DNA的适配度低，提取率还有待提高。

发明内容

本发明提供一种能够高效提取全血基因组DNA的磁珠法核酸提取试剂盒，具体的，本发明的技术方案如下：

一种磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，包括裂解液、磁珠、蛋白酶k溶液、清洗液I、清洗液II、洗脱液，其中：

所述裂解液的成分和含量如下：

所述磁珠为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠；

所述清洗液I的成分和含量如下：

所述清洗液II为70％乙醇；

所述洗脱液的成分和含量如下：

缓冲液 0.04-0.05mol/L

亚氨基二琥珀酸四钠 0.004-0.04mol/L；

所述蛋白酶k溶液的成分和含量如下：

蛋白酶k 10-20mg/ml。

进一步的，所述非离子表面活性剂为NP-40、Tween-20、Triton-X100中的至少一种。

进一步的，所述缓冲液为pH7.0-8.0Tris-HCl、磷酸缓冲液中的一种。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1.本发明的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒添加多聚腺苷酸，极大提高所提取核酸纯度和稳定性，A260/A280为1.8-2.0，A260/A2302.0，有利于PCR、southern、RFLP等下游实验的顺利进行。

2.使用亚氨基二琥珀酸四钠可以更高效破坏细胞膜结构，并更加高效、快速的螯合金属离子。在含有表面活性剂的体系中，加入一定含量的卡波姆2020，增加溶液的稳定性，可以提高配方的耐电解性和高pH值适应性。

3.本发明的磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒可以快速、简单、通用的从血液、唾液、鼻液、真菌，动物组织，细菌等样本中分离纯化核酸，实现多体系通用提取，克服了现有试剂盒适配度低，提取率低等问题。

附图说明