[发明专利]一种改善肠道菌群平衡的益生菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种改善肠道菌群平衡的益生菌剂的制备方法，其特征在于，从甘蔗和山楂中提取得到多糖经过复合酶酶解后，经嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、多形拟杆菌发酵得到多糖酶解发酵产物，与多糖酶解发酵产物、短链脂肪酸组合物、益生元组合物和凝结芽孢杆菌TQ33混合均匀得到活性组合物，以交联羧基化壳聚糖为壁材，制得改善肠道菌群平衡的益生菌剂；所述复合酶为纤维素酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶的复配混合物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.甘蔗多糖的提取：将新鲜甘蔗去皮，切段，榨汁，过滤，得到甘蔗汁，加热至35-45℃后加入磷酸，搅拌混合均匀，加入碳酸钠调节溶液pH值为6.9-7.1，加热至55-65℃后加入亚硫酸溶液，搅拌均匀，加入碳酸钠调节溶液pH值为6.9-7.1，加热至75-85℃后加入聚丙烯酰胺溶液，搅拌混合均匀，沉淀，过滤，得到甘蔗清汁；向甘蔗清汁中加入三氯乙酸-乙腈溶液，沉淀，过滤，滤液中加入乙醇，沉淀，离心，沉淀物复溶于水后，再次加入乙醇沉淀，离心，洗涤沉淀物，干燥，得到甘蔗多糖；

S2.山楂多糖的提取：将新鲜山楂去核，干燥，粉碎，得到山楂粉，加入水中，加热至沸腾提取，加入乙醇，沉淀，离心，沉淀物复溶于水后，再次加入乙醇沉淀，离心，洗涤沉淀物，干燥，得到山楂多糖；

S3.甘蔗和山楂多糖的酶解：将步骤S1制得的甘蔗多糖和步骤S2制得的山楂多糖混合溶于水中，加入复合酶酶解，灭酶，过滤，得到甘蔗和山楂多糖的酶解产物；

S4.菌种的活化：将嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、多形拟杆菌接种于高氏培养基中，微缺氧条件下培养成菌种种子液；

S5.甘蔗和山楂多糖酶解产物的发酵：将步骤S4中制得的嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、多形拟杆菌菌种种子液接种至步骤S3制得的甘蔗和山楂多糖的酶解产物中，微缺氧条件下发酵培养第一时间段，然后加入含有铁离子和维生素组合物的水溶液，继续发酵培养第二时间段，过滤，浓缩，冷冻干燥，得到多糖酶解发酵产物；

S6.短链脂肪酸组合物的制备：将乙酸、丙酸、丁酸混合均匀，制得短链脂肪酸组合物；

S7.益生元组合物的制备：将菊粉、人乳寡糖、蓝莓多酚混合均匀，制得益生元组合物；

S8.活性组合物的制备：将步骤S5制得的多糖酶解发酵产物、步骤S6制得的短链脂肪酸组合物、步骤S7制得的益生元组合物和凝结芽孢杆菌TQ33混合均匀，制得活性组合物；

S9.羧基化壳聚糖的制备：将壳聚糖溶于酸液中后，加入α-酮戊二酸，加热搅拌反应第一时间段后，加入硼氢化钠，继续搅拌反应第二时间段，加入乙醇，过滤，洗涤，干燥，研细，得到羧基化壳聚糖；

S10.改善肠道菌群平衡的益生菌剂的制备：将步骤S8制得的活性组合物溶于水中，加入羧基化壳聚糖，搅拌混合均匀后，用SPG膜进行快速膜乳化，形成乳液，加入金属离子溶液，常温固化，过滤，干燥，得到改善肠道菌群平衡的益生菌剂。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述亚硫酸溶液的浓度为5-8wt%，所述聚丙烯酰胺溶液的浓度为0.02-0.07%；所述三氯乙酸-乙腈溶液中三氯乙酸和乙腈的体积比为3-5：1；所述甘蔗汁、磷酸、亚硫酸溶液、聚丙烯酰胺溶液的体积比为1000：0.5-1：10-20：0.5-1；所述甘蔗清汁和三氯乙酸-乙腈溶液的体积比为2-5:1；所述乙醇的添加量为加至乙醇的含量为80-85wt%；步骤S2中所述加热至沸腾提取的时间为1-2h；所述乙醇的添加量为加至乙醇的含量为80-85wt%。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述复合酶为纤维素酶、木聚糖酶和甘露聚糖酶按照质量比为4:2-3:1-2的复配混合物；所述酶解时间为3-5h，酶解温度为40-50℃；所述甘蔗多糖、山楂多糖和复合酶的质量比为2-5:1-3:0.2-0.3。