[发明专利]一种检测蜜蜂亮热厉螨的引物组合和探针及其应用

权利要求书

1.一种用于检测蜜蜂亮热厉螨的引物对，其特征在于，所述引物对为特异性扩增COI基因或含有所述COI基因片段的一对引物，所述COI基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1。

2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于，所述引物对由引物TCL_F和引物TCL_R组成，所述引物TCL_F为SEQ ID No.2所示的单链DNA分子；所述引物TCL_R为SEQ ID No.3所示的单链DNA分子。

3.一种用于检测蜜蜂亮热厉螨的组合物，其特征在于，所述组合物由权利要求1或2所述的引物对和蜜蜂亮热厉螨特异性探针组成，所述蜜蜂亮热厉螨特异性探针为与所述COI基因特异结合的单链DNA分子。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID No.4。

5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团。

6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记FAM，3’端标记BHQ-1。

7.一种用于检测蜜蜂亮热厉螨的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包含权利要求1所述的引物对或权利要求3-6中任一所述的组合物。

8.权利要求1所述的引物对或权利要求3-6中任一所述组合物的下述任一种应用：

A1)在检测蜜蜂亮热厉螨或制备用于检测蜜蜂亮热厉螨的产品中的应用；

A2)在检测COI基因或制备用于检测COI基因的产品中的应用；

A3)在鉴定或辅助鉴定蜜蜂亮热厉螨中的应用；

A4)在制备用于鉴定或辅助鉴定蜜蜂亮热厉螨的产品中的应用；

A5)在鉴别区分蜜蜂亮热厉螨和其他蜂螨或制备用于鉴别区分蜜蜂亮热厉螨和其他蜂螨的产品中的应用；

A6)在蜜蜂亮热厉螨防控中的应用。

9.一种的检测蜜蜂亮热厉螨的方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1所述引物对或权利要求3-6中任一所述组合物对待测样品进行PCR扩增反应，根据PCR扩增产物确定待测样品是否含有蜜蜂亮热厉螨或待测样品是否为蜜蜂亮热厉螨。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述根据PCR扩增产物确定待测样品是否含有蜜蜂亮热厉螨或待测样品是否为蜜蜂亮热厉螨的方法为下述任一种：

B1)根据PCR扩增产物中是否含有一个大小为134bp的DNA片段，确定待测样品是否含有蜜蜂亮热厉螨或是否为蜜蜂亮热厉螨：如果PCR扩增产物中含有一个大小为134bp的DNA片段，所述待测样品中含有蜜蜂亮热厉螨或为蜜蜂亮热厉螨；如果PCR扩增产物中不含有一个大小为134bp的DNA片段，所述待测样品中不含有蜜蜂亮热厉螨或不为蜜蜂亮热厉螨；

B2)根据PCR扩增产物的扩增曲线和/或溶解曲线确定待测样品是否含有蜜蜂亮热厉螨或是否为蜜蜂亮热厉螨：如果扩增曲线为S型曲线确定待测样品中含有蜜蜂亮热厉螨或为蜜蜂亮热厉螨；如果扩增曲线不为S型曲线，确定待测样品中不含有蜜蜂亮热厉螨或不为蜜蜂亮热厉螨；如果溶解曲线为单峰型曲线确定待测样品中含有蜜蜂亮热厉螨或为蜜蜂亮热厉螨；如果溶解曲线不为单峰型曲线或无峰，确定待测样品中不含有蜜蜂亮热厉螨或不为蜜蜂亮热厉螨；

B3)根据PCR扩增产物的Ct值确定待测样品是否含有蜜蜂亮热厉螨或是否为蜜蜂亮热厉螨：如果Ct值≤35确定待测样品中含有蜜蜂亮热厉螨或为蜜蜂亮热厉螨；如果Ct值35，确定待测样品中不含有蜜蜂亮热厉螨或不为蜜蜂亮热厉螨。