[发明专利]用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的引物组合、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的引物组合，其特征在于，检测的基因位点及对应的正向引物、反向引物和延伸引物的序列如下表所示：

2.一种用于检测人类中性粒细胞抗原基因分型的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组合。

3.应用权利要求1所述引物组合检测人类中性粒细胞抗原基因分型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提取待测样本DNA；

S2、以S1的DNA为模板，使用多重PCR技术扩增含有目的SNP的DNA序列，扩增引物为权利要求1中的正向引物和反向引物；

S3、扩增的PCR产物SAP处理后，利用权利要求1中的延伸引物进行单碱基延伸；

S4、获得的单碱基延伸产物，转移到SpectroCHIP芯片上，进行质谱检测，确定其基因型。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S2中扩增体系为：超纯水0.8μL，含20mM Mg²⁺的10×PCR Buffer 0.5μL，25mM MgCl₂ 0.4μL，25mM dNTP0.1μL，0.5μM PCR引物混合液1.0μL，5U/μL HotstarTaq酶0.2μL，20-50ng/μL的人基因组DNA溶液2.0μL。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S2中扩增程序为：95℃，2min；45个循环95℃，30sec，56℃，30sec，72℃，1min；72℃，保持5min，4℃保温。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，S3中SAP处理体系为：超纯水1.53μL，SAP缓冲液0.17μL，SAP酶0.30μL。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，S3中SAP处理程序为：37℃40min；85℃，5min；4℃保温。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，S3中延伸体系为：超纯水0.62μL，PLEXBuffer缓冲液0.2μL，iPLEX Termination Mix 0.2μL，延伸引物混合液0.94μL，iPLEX ProEnzyme酶0.04μL。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，S3中延伸程序为：

94℃，30sec；

40个循环：94℃，5sec；(52℃，5sec；80℃，5sec)5个循环；

72℃，3min；

4℃保温。