[发明专利]一种重组流感微胶囊口服疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种重组流感微胶囊口服疫苗，其特征在于，包括胶囊壳和胶囊内容物；

所述胶囊内容物为重组流感微胶囊冻干粉，包括壁材和芯材；

所述壁材为复合微生态制剂，包括酵母菌和枯草芽孢杆菌；

所述芯材为4个毒株的HA基因编码的抗原蛋白，4个毒株分别为甲型H1N1、甲型H3N2、乙型Yamagata系和乙型Victoria系；

甲型H1N1毒株的HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

甲型H3N2毒株的HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

乙型Yamagata系毒株的HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

乙型Victoria系毒株的HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述的一种重组流感微胶囊口服疫苗，其特征在于，所述酵母菌的活菌数量为1×10⁹~3.0×10¹⁰CFU/g；所述枯草芽孢杆菌的活菌数量为2×10⁹~5.0×10¹⁰CFU/g。

3.如权利要求1所述的一种重组流感微胶囊口服疫苗，其特征在于，所述壁材和芯材的体积比为0.01~3：0.01~1。

4.如权利要求1所述的一种重组流感微胶囊口服疫苗，其特征在于，所述抗原蛋白含量为15~65μg。

5.如权利要求1所述的一重组流感微胶囊口服疫苗，其特征在于，还包括保护剂；

所述保护剂包括如下，按重量份数计，螺旋藻多肽0.1~0.3份、玉米蛋白多肽0.05~0.5份和小球藻多肽0.05~0.5份；

所述抗原蛋白与保护剂按质量比0.5~5：0.1~3混合。

6.如权利要求1所述的一种重组流感微胶囊口服疫苗，其特征在于，所述胶囊壳为灵芝复合水提物；

所述灵芝复合水提物由白灵芝水提物、黑灵芝水提物和辅料按质量比1~5：1~5：0.2~3组成；

所述辅料包括如下，按重量份数计，微晶纤维素0.1~0.5份、维生素C 0.02~0.1份、硬脂酸镁0.1~0.5份、聚乙二醇6000 0.2~0.7份、碳酸氢钠0.01~0.1份。

7.如权利要求1~6任一所述的一种重组流感微胶囊口服疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（一）复合微生态制剂的制备

将酵母菌和枯草芽孢杆菌依次经过菌种活化、一级菌种制备、二级菌种制备和三级高密度发酵，得酵母菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物；

（二）壁材的制备

将酵母菌发酵产物和枯草芽孢杆菌发酵产物经离心、重悬、冷冻干燥后，得酵母菌冻干粉和枯草芽孢杆菌冻干粉；

将酵母菌冻干粉和枯草芽孢杆菌冻干粉按质量比1~5:1~5混合均匀，即得壁材；

（三）芯材的制备

将流感甲型H1N1、甲型H3N2、乙型Yamagata系和乙型Victoria系4种毒株的HA基因通过同源重组的方式整合到杆状病毒基因组上，经过多级高密度发酵昆虫Expisf9-ZY细胞与杆状病毒，采用两步纯化，再经过0.22μm除菌过滤，获得甲型H1N1、甲型H3N2、乙型Yamagata系和乙型Victoria系的HA基因编码的抗原蛋白；

所述昆虫Expisf9-ZY细胞保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45248；

所述同源重组选取flashBac表达系统、flashBAC GOLD表达系统或flashBAC ULTRA表达系统中其中一种或多种；

所述两步纯化为Q离子交换层析法纯化和SP离子交换层析法纯化；

将抗原蛋白和保护剂混合均匀即得芯材；

（四）重组流感微胶囊的制备

将壁材和芯材混合均匀，经喷雾干燥，得重组流感微胶囊；

（五）成品包装

将重组流感微胶囊装入胶囊壳内即可。