[发明专利]嗜热链球菌FUA329及其发酵生产尿石素A的方法

权利要求书

1.一种嗜热链球菌FUA329，该菌株已经于2022年5月23日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.24963。

2.权利要求1所述的嗜热链球菌FUA329用于产尿石素A。

3.一种组合物用于制备改善肠道菌群药物的用途，其特征在于，所述组合物含有权利要求1所述的嗜热链球菌FUA329。

4.如权利要求1所述的嗜热链球菌FUA329的筛选方法，包括以下步骤：

i)验证产尿石素A的母乳样本：在无菌条件下，将母乳样本接种到含有鞣花酸的ABB液体培养基中，厌氧条件下培养4天，以含鞣花酸不含母乳的培养基和含母乳不含鞣花酸的培养基做对照，每天收集一次样本，用有机溶剂C₂H₃N:H₂O:HCOOH(80：19.9：0.1,V:V:V:)等体积萃取，进行HPLC和HPLC-MS/MS分析，筛选出产尿石素A的母乳样本；

ii)筛选产尿石素A的菌株：用已被验证产尿石素A的母乳样本发酵液，添加生理盐水稀释后，取0.1mL涂布在ABB固体平板上，在厌氧条件下培养之后，获取多个微生物菌落，每个菌落分别接种于含有鞣花酸的ABB液体培养基中，并在厌氧条件下进行发酵培养后，对发酵液进行HPLC和HPLC-MS/MS分析，筛选出产尿石素A的菌株，命名为FUA329。

5.如权利要求1所述的所述嗜热链球菌FUA329用于产尿石素A的方法，包括以下步骤：

1)菌种活化：取-80℃冰箱里保藏于甘油管中的FUA329于ABB固体培养基上进行三区划线，获得单菌落；

2)种子培养：将活化得到的菌株FUA329的单菌落接种到种子培养基中培养获取种子液；

3)发酵培养：将种子液接种于添加了鞣花酸的发酵培养基中进行发酵培养；

4)分离提取：将发酵液离心，所得上清液即为尿石素A粗提取液。

6.根据权利要求5所述的产尿石素A的方法，其特征在于，所述步骤1)中的ABB固体培养基配方为添加有2％琼脂的ABB厌氧基础肉汤培养基。

7.根据权利要求5所述的产尿石素A的方法，其特征在于，所述步骤2)中的的种子培养基为ABB厌氧基础肉汤培养基，pH6.8±0.2，其配方包括：蛋白胨16.0g/l，酵母浸粉7.0g/l，氯化钠5.0g/l，淀粉1.0g/l，葡萄糖1.0g/l，丙酮酸钠1.0g/l，精氨酸1.0g/l，琥珀酸钠0.5g/l，半胱氨酸盐酸盐0.5g/l，碳酸氢钠0.4g/l，焦磷酸铁0.5g/l，氯化血红素0.005g/l，维生素K0.0005g/l，巯基乙酸钠0.5g/l，二硫苏糖醇1.0g/l；所述步骤2)中的培养条件为在37℃厌氧条件下培养24h。

8.根据权利要求5所述的产尿石素A的方法，其特征在于，所述步骤3)中的发酵培养基为含20μM鞣花酸的ABB厌氧基础肉汤培养基。

9.根据权利要求5所述的产尿石素A的方法，其特征在于，所述步骤3)中的种子液的接种量为2％，发酵培养条件为在37℃厌氧条件下培养48h。

10.根据权利要求5所述的产尿石素A的方法，其特征在于，所述步骤4)中的离心条件为在12000×g、4℃离心10min。