[发明专利]激活猪的PJA1基因表达的制剂在制备猪抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用

说明书

本发明属于基因工程及生物医药领域，公开了激活猪的PJA1基因表达的制剂在制备猪抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用，所述的PJA1基因包括猪中的NCBI登录号为NC_010461.5的PJA1基因。本发明发现该基因在IPEC‑J2细胞（猪小肠上皮细胞）中被激活之后能够抑制PEDV的增殖，故本基因可作为抑制PEDV复制的疫苗药物的开发与抗病育种研究的新型靶点。

技术领域

本发明属于基因工程及生物医药领域，具体涉及激活猪的PJA1基因表达的制剂在制备猪抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染引起的一种急性、高度接触性肠道传染病。该病毒可感染所有年龄段的猪，并表现出不同程度的症状，其中哺乳期仔猪受影响最大，感染将出现严重的水样腹泻、呕吐、脱水和死亡(死亡率接近100％)。尽管疫苗接种是预防和对抗病毒性疾病最有效的方法，但是由于PEDV突变毒株的持续出现，导致难以预防该病的流行和爆发。自1971年在英国首次报道以来，PED慢慢传播到世界各地，并给包括我国在内的全球养猪业造成重大的经济损失，预防和控制其流行是一项持续的全球性挑战。因此，亟需开展PEDV感染相关的宿主基因鉴定及其互作研究，为抗PED猪品种培育和疫苗药物研发等提供理论基础及靶基因。

发明内容

本发明的目的在于提供了激活猪的PJA1基因表达的制剂在制备猪抗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用，所述的PJA1基因包括猪中的NCBI登录号为NC_010461.5的PJA1基因，或是编码SEQ ID NO.2所示蛋白的基因。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

激活猪PJA1基因表达的制剂在制备抗PEDV感染药物中的应用；所述的PJA1基因为猪中的NCBI登录号为NC_010461.5的PJA1基因，或是编码SEQ ID NO.2所示蛋白的基因；

以上所述的应用中，所述的PJA1基因为SEQ ID NO.1所示；

以上所述的应用中，优选的，所述的激活方法包括但不限于针对猪PJA1基因的CRISPR/SAM激活技术、或基因过表达技术。

当使用CRISPR/SAM激活技术时，激活猪中NCBI登录号为NC_010461.5的PJA1基因表达的制剂为gRNA：GACCCGCCCCCTTGATGTGG。

本发明的保护内容还包括：一种抗PEDV感染的细胞模型，其特征在于包含有激活猪PJA1基因的表达制剂。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

申请人通过CRISPR/SAM激活技术在IPEC-J2细胞中靶向激活PJA1的表达，首次发现激活PJA1的表达的细胞可以通过影响PEDV的复制从而抑制PEDV的感染，该基因可作为PEDV的新型抗病靶点。本发明为研制有效安全防治猪流行性腹泻病的新型疫苗药物提供了新的靶标，也为抗猪流行性腹泻病育种研究提供了新型候选基因，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1：IPEC-J2-SAM单克隆细胞系的激活基因表达效果验证：

IPEC-J2-SAM中转入靶向B4GALNT2基因的4条gRNA，qPCR检测B4GALNT2基因的激活效果，β-actin为内参基因(*P0.05，t-test)。

图2：IPEC-J2-SAM-PJA1细胞的构建及验证：

qPCR检测PJA1基因在IPEC-J2-SAM-NTC细胞(图中标记为NTC)和IPEC-J2-SAM-PJA1细胞(图中标记为PJA1)中的表达，β-actin为内参基因(**P0.01，t-test)。