[发明专利]一种过表达ZXDC慢病毒载体的构建和应用

权利要求书

1.一种过表达ZXDC慢病毒载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

S1：通过PCR扩增如SEQ ID NO.1所示的两端含有BamH1酶切位点和AgeI酶切位点的ZXDC转录激活域及CIITA结合区域得到PCR扩增产物；

S2：双酶切pLCAG-EGFP慢病毒空载体；

S3：将步骤S1制得的扩增产物与步骤S2双酶切后的pLCAG-EGFP慢病毒空载体进行连接后得到重组产物pLCAG-ZXDC-EGFP，重组产物pLCAG-ZXDC-EGFP再经转化、挑取单克隆扩增培养、提取质粒后测序验证；

S4：验证步骤S3测序正确的重组产物pLCAG-ZXDC-EGFP的表达情况，验证正确的即为过表达ZXDC慢病毒载体。

2.根据权利要求1所述的一种过表达ZXDC慢病毒载体的构建方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：用BamH1酶和AgeI酶对pLCAG-EGFP慢病毒空载体进行双酶切。

3.根据权利要求1所述的一种过表达ZXDC慢病毒载体的构建方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括：

S3.1：使用重组酶Exnase II将步骤S1的扩增产物和步骤S2双酶切后的pLCAG-EGFP慢病毒空载体连接得到重组产物pLCAG-ZXDC-EGFP；

S3.2：将重组产物pLCAG-ZXDC-EGFP加入到感受态细胞中通过热激法进行转化，然后加入不含抗生素的培养基于200-300rpm下摇菌1-2h，离心重悬转化后的菌液，再涂布于含抗生素平板上倒置培养14-16h，在倒置培养后的平板上挑取单克隆细胞加入含抗生素的培养基中扩增培养12-16h，最后从培养后的菌液中提取质粒；

S3.3：设计测序引物对步骤S3.2提取的质粒进行测序验证。

4.根据权利要求3所述的一种过表达ZXDC慢病毒载体的构建方法，其特征在于，所述测序引物序列包括如SEQ ID NO.6所示的F1，如SEQ ID NO.7所示的F2。

5.根据权利要求3所述的一种过表达ZXDC慢病毒载体的构建方法，其特征在于，所述重组产物pLCAG-ZXDC-EGFP测序序列是如SEQ ID NO.8所示的序列。

6.一种慢病毒，其特征在于，所述慢病毒的制备方法包括：将权利要求1-5所述构建方法所构建的过表达ZXDC慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞，制备得到ZXDC过表达重组慢病毒。

7.根据权利要求6所述的慢病毒，其特征在于，所述慢病毒包装质粒包括pVSV-G、psPAX2、pRev或pRRE。

8.根据权利要求6所述的慢病毒，其特征在于，所述宿主细胞为293T细胞。

9.如权利要求1-5所述构建方法所构建的过表达ZXDC慢病毒载体、权利要求6-8所述的慢病毒在调控小胶质细胞炎症因子表达中的应用。