[发明专利]鉴别非结核、结核分枝杆菌及其利福平耐药性的检测方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种鉴别非结核、结核分枝杆菌及其利福平耐药性的组合物，包括引物组和探针组，所述引物组包括：

NTM引物：

NTM-F：5’-GGAAGTYGCCAAGAAGACYGAC-3’

NTM-R：5’-CTTSAGACCCAKCGGGTT-3’

MTBC引物：

MTBC-F：5’-CAGGACCACGATCGCTGA-3’

MTBC-R：5’-TAGGTGCTGGTGGTCCGA-3

人源基因引物：

IC-F：5’-CGGAGGGAAGCTCATCAG-3’

IC-R：5’-CCCTAGTCTCAGACCTTCCCA-3’；

所述探针组包括：

NTM-fast-P：5’-CRGCGACGTTACGCAGACCTTCC-3’

NTM-slow-P1：5’-CCGTGGCCGTCGTCGTGC-3’

NTM-slow-P2：5’-CYGGCGACGGCACCACCACG-3’

MTBC-P：5’-CACAGCCCGTCCCGCCGA-3’

IC-P探针：5’-CCACGAGCTGAGTGCGTCCTGTC-3；

还包括rpoB基因内参的引物：

rpoB-F:CAGACGTTGATCAACATCCG

rpoB-R：TACGGCGTTTCGATGAAC

还包括rpoB基因探针：

rpoB-P1-516：TGGACCAGAACAACC

rpoB-P2-526：ACCCACAAGCGCC

rpoB-P3-531：CCAGCGCCGACAG

其中N代表碱基A/T/C/G，Y代表碱基C/T，S代表碱基G/C，K代表碱基G/T，R代表碱基A/G；

其中探针组中每条探针的序列两端标记有荧光基团和淬灭基团，且IC-P探针、MTBC-P、NTM-fast-P使用不同颜色的荧光基团，NTM-slow-P1、NTM-slow-P2使用的荧光基团颜色不同于前述IC-P探针、MTBC-P、NTM-fast-P。

2.根据权利要求1所述的鉴别非结核、结核分枝杆菌及其利福平耐药性的组合物，其特征在于：所述荧光基团选自FAM、HEX、ROX、CY5；所述淬灭基团选自BHQ1、BHQ2。

3.根据权利要求2所述的鉴别非结核、结核分枝杆菌及其利福平耐药性的组合物，其特征在于：所述NTM-fast-P的荧光基团选用HEX，所述MTBC-P的荧光基团选用FAM，所述NTM-slow-P1、NTM-slow-P2的荧光基团选用ROX，所述IC-P探针的荧光基团选用CY5；所述rpoB-P1-516探针的两端分别修饰FAM基团和BHQ1基团，所述rpoB-P2-526探针的两端分别修饰HEX基团和BHQ1基团，所述rpoB-P3-531探针的两端分别修饰ROX基团和BHQ2基团。

4.一种鉴别非结核、结核分枝杆菌及其利福平耐药性的试剂盒，其特征在于含有权利要求1-3中任一项所述的组合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包括A、B两种反应体系，其中A体系包括分枝杆菌反应液1、无酶水、酶预混液、阳性质控品1和阴性对照；B体系包括分枝杆菌反应液2、无酶水、酶预混液、阳性质控品2和阴性对照，分枝杆菌反应液1含有权利要求1-3中任一项所述的NTM引物和探针、MTBC引物和探针及人源的引物组和探针组，分枝杆菌反应液2含有权利要求1-3中任一项所述的rpoB基因内参的引物、rpoB基因探针、人源的引物组和探针组。