[发明专利]一种鱼鳞基质骨修复材料的制备方法及应用

权利要求书

1.一种鱼鳞基质骨修复材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1) 新鲜鱼鳞去除油脂、鱼银杂质后，用蒸馏水反复彻底清洗，随后，将清洗后的鱼鳞进行脱细胞处理后，自然风干，得干燥鱼鳞；

2) 将步骤1）所得干燥鱼鳞与碱处理剂加入至反应器中，搅拌均匀，室温反应后，去离子水反复清洗鱼鳞至中性，沥干，得碱处理后的中性鱼鳞；

3) 将步骤2）所得中性鱼鳞与有机酸处理剂加入至反应器中，搅拌均匀，于室温下继续反应后，去离子水反复清洗鱼鳞至中性，沥干，得酸处理后的中性鱼鳞；

4) 采用超声辅助热水法，将装有步骤3）所得中性鱼鳞和去离子水的容器放置于预热至反应温度的超声辅助设备反应器内，边用超声波处理边加热，进行脱胶原处理；

5) 将步骤4）所得混合物用双层纱布过滤，所得的滤渣置于烘箱中干燥；随后，酒精杀菌，紫外线辐照，浸泡于含胎牛血清的磷酸盐缓冲液，最后得到鱼鳞基质骨修复材料；

其中，所述的步骤1) 中，脱细胞处理包括如下步骤：将清洗后的鱼鳞浸泡于含有质量浓度为0.5-5 % Triton X-100和质量浓度为1-5 % SDS的浓度为10-100 mM、pH 7.4的混合Tris-HCl低渗溶液中搅拌24小时，之后替换为含有质量浓度为0.5-5 % Triton X-100和质量浓度为1-5 % SDS的浓度为0.5-1 M、pH 7.4的混合Tris-HCl高渗溶液继续搅拌24小时；清洗后，在浓度为0.01 M、pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中用5 μg/mL DNase和5 μg/mL RNase于37℃消化5小时，再进行清洗；

所述的步骤2) 中，所用的碱处理剂为氢氧化钙溶液、氢氧化镁溶液、氢氧化锶溶液中的一种或几种；

所述的步骤3) 中，所用的有机酸处理剂为柠檬酸溶液、苹果酸溶液、醋酸溶液、乳酸溶液中的一种或几种；

所述的步骤4) 中，超声设备功率为800-1200瓦，反应温度为80-95℃，每隔10分钟超声一次，每次超声时间为20分钟，反应时间为1-3小时。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2) 中，步骤1）所得干燥鱼鳞与碱处理剂的质量比为1:10-1:20，碱处理剂的质量浓度为20-40%，室温反应3-5小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤3) 中，步骤2）所得中性鱼鳞与有机酸处理剂的质量比为1:10-1:20，有机酸处理剂的质量浓度为5-15%，室温下反应1-2小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤5) 中，于60℃烘箱中干燥48小时，使用75%酒精杀菌30分钟，紫外线辐照12小时，37℃环境中浸泡于含体积比为5-20%胎牛血清的浓度为0.01M、pH 7.4的磷酸盐缓冲液48小时，紫外线辐照12小时后的鱼鳞基质与磷酸盐缓冲液的质量比为1:5。

5.一种鱼鳞基质骨修复材料，其特征在于，采用如权利要求1~4任一项所述的制备方法制备得到。

6.一种如权利要求5所述的鱼鳞基质骨修复材料在制备组织工程中的骨缺损修复材料领域的应用。