[发明专利]检测黄热病毒双基因引物探针组、试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测黄热病毒双基因引物探针组，包括同时检测黄热病毒两个目的基因的引物和探针，引物包括上游引物PF1、下游引物PR1及检测探针P1，上游引物PF1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物PR1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，检测探针P1的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；还包括上游引物PF2、下游引物PR2及检测探针P2，上游引物PF2的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，下游引物PR2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，检测探针P2的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。本发明提供的试剂盒具有高敏感性、高特异性、高稳定性等优点，可以对样本中的黄热病毒进行快速检测。

技术领域

本发明涉及一种用于黄热病毒检测的双基因引物探针组（简称为引物探针组），同时也涉及含有该引物探针组的试剂盒及其应用。

背景技术

黄热病毒通过蚊子叮咬传播，感染人体后可导致黄热病。黄热病的症状包括发热、头痛、黄疸、肌肉疼痛、恶心、呕吐和乏力。小部分感染病毒的患者会出现严重症状，其中近半数在7～10天内死亡。在黄热病流行地区，特别是一些没有适当疫苗接种制度的地方，黄热病的流行形势仍然严峻。在非流行地区，也常有零星黄热病例的输入，并极容易导致重症或死亡的发生。因此，快速诊断黄热病毒感染对黄热病的流行和防治均具有重要意义。

以细胞培养为基础的黄热病诊断方法耗时长，而且对实验室的条件和检验人员的技术要求较高，具有很大的局限性。近年来，实时定量PCR因其较高的灵敏度而被广泛应用于的病毒检测。目前，常用的检测黄热病毒的实时定量PCR多采用两步法，需要进行2轮操作，首先将提取的RNA逆转录为cDNA，再对cDNA产物进行实时定量PCR，耗时较长，而且需要分别配制逆转录体系和实时定量PCR体系，操作较为繁琐，而且中间需对cDNA产物进行开盖操作，容易造成污染，对实验人员技术水平要求高，难以在一般的实验室及医院广泛普及。

另外，目前用于检测黄热病毒的实时定量PCR方法均为单基因检测，检测的特异性、灵敏度和可靠性不佳，临床样本复查率较高。

发明内容

为了解决背景技术中所述的黄热病毒检测中特异性和灵敏度较低，可靠性不佳的问题，本发明首先提供一种能够准确检测鉴定黄热病毒的引物探针组。

本发明所要解决的另一技术问题是提供一种含有上述引物探针组的试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

根据本发明实施例的第一方面，提供一种检测黄热病毒双基因引物探针组， 包括同时检测黄热病毒两个目的基因的引物和探针，所述引物包括上游引物PF1、下游引物PR1及检测探针P1，所述上游引物PF1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物PR1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述检测探针P1的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述引物探针组还包括上游引物PF2、下游引物PR2及检测探针P2，所述上游引物PF2的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述下游引物PR2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述检测探针P2的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

其中较优地，所述上游引物PF1、所述下游引物PR1及所述检测探针P1用于检测黄热病毒锚定蛋白C基因。

其中较优地，所述上游引物PF2、所述下游引物PR2及所述检测探针P2用于检测黄热病毒5’端非编码区基因。

上述引物探针组在制备检测黄热病毒的产品中的用途。

其中较优地，所述产品为检测黄热病毒的试剂或。

根据本发明实施例的第二方面，提供一种黄热病毒双基因检测的试剂盒，其中包括上述的引物探针组。

其中较优地，所述试剂盒还包括用于黄热病毒检测的PCR缓冲液、标准品、阴性对照和阳性对照。