[发明专利]一种幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC-1及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC‑1，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供了一种核酸，编码权利要求1所述的幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC‑1。该核酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明提供的幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC‑1具有可溶性表达、易纯化、纯度高、制备方法简便等优点，具有显著的经济效益，且动物实验证明其有效刺激机体产生免疫应答并具备良好的免疫保护作用，可作为预防幽门螺杆菌感染的疫苗候选成分。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及幽门螺杆菌(Helicobacter prlor，HP)重组蛋白NC-1的制备及应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter prlor，HP)是一种革兰氏阴性菌，是危害人类健康最常见的细菌病原体之一。其全球感染率为19％-88％，年复发率为1.75％-2.4％，并且呈逐年递增的趋势，其中发展中国家的HP感染率高达90％，且年复发率远高于发达国家。而在HP感染患者中有15％-20％会发展为较为严重的疾病，包括十二指肠、胃溃疡，粘膜相关组织淋巴瘤和胃腺癌。此外，大量的研究证实，HP感染也与其他一些非消化系统疾病的发生有密切关系。

对于HP，世界卫生组织早在1994年就将其归为Ⅰ类致癌物，京都全球共识也将其治疗作为胃癌的一级预防措施。而目前对于HP的治疗常采用抗生素联用的方式。但是抗生素的治疗也存在较多的弊端，如：治疗费用昂贵，复发率居高不下，高龄老人、低龄儿童、孕妇、严重慢性疾病患者等抗衡因素导致无法正常用药等。在这种情况下，只有通过免疫接种的方式来有效的预防感染，逐渐阻断HP的传播，才能从根本上控制其感染，从而降低相关疾病的发生。

众所周知，细菌在维持生存的过程中，一定会涉及营养的吸收、代谢产物的排出，而由于细胞膜的存在，导致大部分离子及化合物都不能直接透过细胞膜进出。这就需要大量特定的膜蛋白完成转运工作，从而保证其吸收、代谢功能。而这其中钠/钙交换蛋白(sodium:calcium antiporter)就是细胞膜上重要的双向转运蛋白，激活时将3个Na⁺转运至胞内/外，同时将1个Ca²⁺转运至胞外/内，从而维持细菌生理功能的平衡。一旦失去这个调控功能，就会导致Ca²⁺超载等异常聚集，对细菌本身造成严重的损伤。正是因为钠/钙交换蛋白在HP生存过程中重要性，导致其广泛分布于细胞膜上且高度保守。

因此，通过生物信息学技术“采用反向疫苗学”筛选出上述蛋白的部分结构，进而研发出HP基因工程疫苗的候选抗原，对于幽门螺杆菌预防和治疗，具有十分重要的意义。

发明内容

本发明目的旨在提供了一种幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC-1及其制备方法，能够有效刺激机体产生免疫应答并具备良好的免疫保护作用，具有良好的临床应用前景。

本发明提供了一种幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC-1，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供了一种核酸，编码上述幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC-1。在优选实现方式中，核酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明提供了上述幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原NC-1的制备方法，包括步骤：

1)质粒构建，原核表达

将上述重组蛋白抗原NC-1核酸连接在表达载体质粒中，将该连接好的质粒转入宿主菌中进行诱导表达；

2)破菌、离心：

收集表达后的菌液用pH为6.0-8.0的破菌液重悬混匀，然后在给定压力下进行均质破菌，之后经离心，收集上清液；

3)分别使用Ni亲和层析柱和SP层析柱对上清液依次进行纯化，即得到重组蛋白抗原NC-1。