[发明专利]水稻广谱抗稻瘟病基因Pi69(t)共分离分子标记及其专用引物有效
| 申请号： | 202211188677.3 | 申请日： | 2022-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN116064903B | 公开（公告）日： | 2023-07-18 |
| 发明（设计）人： | 董丽英;杨勤忠;刘树芳;刘沛;张先闻;李迅东;陶大云 | 申请（专利权）人： | 云南省农业科学院农业环境资源研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/29;C12N15/11 |
| 代理公司： | 云南凌云律师事务所 53207 | 代理人： | 康珉 |
| 地址： | 650205 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 水稻 广谱 稻瘟病 基因 pi69 分离 分子 标记 及其 专用 引物 | ||
1.水稻广谱抗稻瘟病基因Pi69(t)共分离分子标记Pi69(t)-InDel，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种用于检测权利要求1所述的水稻广谱抗稻瘟病基因Pi69(t)共分离分子标记Pi69(t)-InDel的专用引物，所述专用引物由Pi69(t)-InDel-FW正向引物和Pi69(t)-InDel-RV反向引物组成，所述Pi69(t)-InDel-FW正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，Pi69(t)-InDel-RV反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.一种检测水稻亲本中是否存在抗稻瘟病基因Pi69(t)的方法，其特征在于，用权利要求2所述的Pi69(t)-InDel-FW正向引物和Pi69(t)-InDel-RV反向引物对待检测水稻亲本基因组DNA进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳分离，获得长度为201bp片段的水稻亲本为含有抗稻瘟病基因Pi69(t)；扩增出长度为164bp片段的水稻亲本为不含有抗稻瘟病基因Pi69(t)而含有其感病等位基因。
4.如权利要求书3所述的检测水稻亲本中是否存在抗稻瘟病基因Pi69(t)的方法，其特征在于，所述经琼脂糖凝胶电泳分离为经3％琼脂糖凝胶电泳分离。
5.一种检测水稻杂交后代中是否存在抗稻瘟病基因Pi69(t)的方法，其特征在于，用权利要求2所述的Pi69(t)-InDel-FW正向引物和Pi69(t)-InDel-RV反向引物对待检测水稻杂交后代的基因组DNA进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳分离，只获得长度为201bp片段的水稻杂交后代为含有纯合抗稻瘟病基因Pi69(t)的水稻杂交后代材料；只扩增出长度为164bp片段的水稻杂交后代为不含有抗稻瘟病基因Pi69(t)而含有其感病等位基因的水稻杂交后代材料；获得片段长度为201bp和164bp两条片段的水稻杂交后代为含有杂合抗稻瘟病基因Pi69(t)的水稻杂交后代材料。
6.如权利要求书5所述的检测水稻杂交后代中是否存在抗稻瘟病基因Pi69(t)的方法，其特征在于，所述经琼脂糖凝胶电泳分离为经3％琼脂糖凝胶电泳分离。
7.如权利要求3至4任一权利要求所述的检测水稻亲本中是否存在抗稻瘟病基因Pi69(t)的方法，或如权利要求5至6任一权利要求所述的检测水稻杂交后代中是否存在抗稻瘟病基因Pi69(t)的方法，其特征在于：PCR扩增反应体系20μL，其中含有2×ES Taq MasterMix 10μL、10μM Pi69(t)-InDel-FW正向引物1μL、10μM Pi69(t)-InDel-RV反向引物1μL、10ng/μL模板DNA 1μL，ddH2O 7μL；PCR扩增的反应条件为：95℃预变性3min；循环内95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，共32个循环；最终72℃延伸5min。
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