[发明专利]一种暹罗芽孢杆菌0728-11及其固定化菌株制剂的制备方法与应用

说明书

本发明属于微生物领域，公开了一种暹罗芽孢杆菌0728‑11及其固定化菌剂制剂的制备方法与应用。所述的暹罗芽孢杆菌0728‑11由防城港海水中分离纯化获得原始菌株。经中国普通微生物菌种保藏管理中心鉴定，分类命名为暹罗芽孢杆菌，保藏编号为CGMCC No.25116。本发明通过暹罗芽孢杆菌0728‑11培养后获得大量菌体。随后通过海藻酸钠及微孔淀粉将菌体固定，形成固定化的抑藻制剂。本发明的固定化抑藻菌株制剂可以使得菌体可以存在于水体中，且不随水体流动而减少，有效提高抑藻作用，具有较大的应用价值。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种暹罗芽孢杆菌0728-11及其固定化菌株制剂的制备方法与应用。

背景技术

人类的活动增加了局部海域的水体富营养化，藻类得以迅速生长，使得赤潮爆发日益频繁。在我国近海海域，赤潮也不断增加，使滨海地区的生态安全及沿海经济的可持续发展面临巨大的挑战。因此需要研究新型高效环保的赤潮调控方法。

以微生物为基础的抑藻处理方法，安全、环保，可有效控制赤潮。目前，国内外的抑藻微生物研究较多。按菌株使用方法分为两类，一种是微生物直接投放法，是以单纯微生物为基础的杀藻方法；另一种是微生物载体材料固定化法，是将微生物固定化后，投放藻液中控制藻类生长。

菌株固定化技术是通过物理或化学手段将游离的细胞固定于特定区域，并使其保持活性和反复使用的技术。固定化微生物技术具有微生物密度高，微生物流失少，菌体易分离。常见的固定化方法包含：吸附法、共价结合、包埋法等，其中包埋法应用最广。

暹罗芽孢杆菌是一种广泛分布于各种不同生活环境中的腐生细菌，可以产生内生耐热抗逆性芽孢。芽孢不仅对热有抗逆性，还对紫外线、电磁辐射及一些化学药品有很强的抗逆性，它可以忍受各种不良环境。暹罗芽孢杆菌是植物病害生防微生物的重要组成部分，可用于防治多种植物病害。目前，在富营养化水体中有害藻类治理方面应用较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种暹罗芽孢杆菌0728-11及其固定化菌株制剂的制备方法及应用，本发明的固定化抑藻菌株制剂可以使得菌体可以存在于水体中，且不随水体流动而减少，有效提高抑藻作用，具有较大的应用价值。

本发明的第一目的在于提供一种海水中筛选出来的暹罗芽孢杆菌0728-11，分类命名为暹罗芽孢杆菌Bacillus siamensis，该菌株已于2022年6月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（中国北京），保藏编号为CGMCC No.25116。

本发明所述的暹罗芽孢杆菌0728-11的筛选方法包括以下步骤：

(1)取防城港区域海水，采用无菌水对海水进行梯度稀释：10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶，每个梯度稀释液0.1mL涂布在牛肉膏蛋白胨培养基平板上(培养基配方为：牛肉膏:3.0g，蛋白胨:10.0g，NaCl:5.0g，琼脂:15g，纯化水1000mL)，30-37℃培养1-2天。

(2)挑取不同菌落，划线于牛肉膏蛋白胨固体平板上(培养基配方为：牛肉膏:3.0g，蛋白胨:10.0g，NaCl:5.0g，琼脂:15g，纯化水1000mL)，置于30-37℃培养1-2天。观察分离菌落是否纯化。若有杂菌，重复该步骤直至纯培养。

(3)将上述纯化后的菌株接种于牛肉膏蛋白胨液体培养(培养基配方为：牛肉膏:3.0g，蛋白胨:10.0g，NaCl:5.0g，纯化水1000mL)基中，50-100rpm,30-37℃振荡培养1-2天。