[发明专利]牛源化鼠抗布鲁氏杆菌抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及的是一种牛源化鼠抗布鲁氏杆菌抗体及其制备方法与应用。本发明人工合成牛种、绵羊睾丸种、犬种布鲁氏杆菌OMP25蛋白的串联表位蛋白，免疫小鼠并制备单克隆抗体，将抗体的Hv及Lv区域上CDR片段克隆到牛源IgG上相应部位，之后对重组IgG进行整体突变修饰进行牛源化改造，制得牛源化鼠抗布鲁氏杆菌单克隆抗体。本发明的牛源化鼠抗布鲁氏杆菌单克隆抗体制剂具有良好的免疫原性和保护效果，可在动物体内阻断并抑制牛种、犬种、绵羊睾丸种布鲁氏杆菌的繁殖与扩散。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及的是一种牛源化鼠抗布鲁氏杆菌抗体及其制备方法与应用。

背景技术

布鲁氏菌病(Brucellosis)属于重大人畜共患传染病，对人和动物的危害都极大，与狂犬病、非典型肺炎、高致病性禽流感等同属于乙类传染病。目前布鲁氏杆菌疫苗均为活疫苗，不仅对人与动物均有一定的致病作用，而且在免疫动物后会干扰血清学检测并引起孕畜流产，所以目前动物布鲁氏杆菌病的防控以净化为主，同时限制布氏杆菌疫苗的使用范围在一类地区，且不能对种畜与奶畜使用，这导致全国大部分地区只能通过监测与捕杀来达到疫病的净化。因此目前亟需一种能够在动物体内拮抗并阻碍布鲁氏杆菌传播的有效手段。

单克隆抗体制剂是一种有效的体内拮抗病原体的技术手段，但目前单克隆抗体技术在临床治疗应用中的进展较为缓慢，其主要原因在于单克隆抗体大多是鼠源性的，而鼠源性单克隆抗体应用于其他动物或人类治疗时存在诸多问题：一是不能有效地激活机体补体和Fc受体相关的效应系统；二是被机体免疫系统所识别，产生抗原反应，并在机体循环系统中被很快清除掉。因此，为了保持单克隆抗体的抗体活性并减少或消除抗原活性，使用鼠源抗体的Fab片段与靶动物抗体的Fc片段嵌合成完整而有活性的嵌合抗体技术得到了发展。嵌合抗体或对抗体进行靶动物化改造的主体思路是以靶动物的IgG为模板，将Hv及Lv区域上保留FR片段，而将CDR片段替换为相应鼠源片段，这样既保留了抗体的活性，又保证了抗体分子最大程度的靶动物相似性，可以在体内发挥理想的作用。

近年来，布鲁氏杆菌外模蛋白OMP25成为了研究热点，研究发现OMP25蛋白在布鲁氏杆菌感染、致病过程中发挥重要作用，且参与维持细菌的外模功能性结构的稳定，与病原菌在宿主内体繁殖生长过程有关，具备重要免疫原性与抗原保护作用。因此，借助生物信息学分析等手段，寻找布鲁氏杆菌外膜蛋白OMP25有临床意义的抗原表位，制备单克隆抗体并进行靶动物化改造，即可得到同时具备良好分子活性与靶动物一致性的单克隆抗体。利用该抗体制备成体内注射制剂，将有效改善布鲁氏杆菌病的防控与治疗现状，对布鲁氏杆菌病的防控与净化以及公共卫生安全具有重要意义。

公开号为CN113354742A的发明专利公开了一种布鲁氏杆菌基因工程亚单位疫苗及其制备方法和应用，具体为一种原核表达的布鲁氏杆菌外膜蛋白的串联表位蛋白；该布鲁氏杆菌外膜蛋白串联表位蛋白的氨基酸序列由牛种Omp25蛋白、犬种Omp25蛋白、猪种Omp25蛋白、绵羊睾丸种Omp25蛋白、羊种Omp31蛋白等16种蛋白的氨基酸序列组成；与本专利相比，该串联表位蛋白的氨基酸序列组成更为复杂。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种布鲁氏杆菌外膜蛋白OMP25串联表位蛋白，该布鲁氏杆菌外膜蛋白OMP25串联表位蛋白的氨基酸序列由牛种OMP25蛋白、犬种OMP25蛋白、绵羊睾丸种OMP25蛋白的氨基酸序列组成。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

布鲁氏杆菌外膜蛋白OMP25串联表位蛋白，所述布鲁氏杆菌OMP25蛋白串联表位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步，所述布鲁氏杆菌OMP25蛋白串联表位蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步，所述布鲁氏杆菌外膜蛋白OMP25串联表位蛋白的氨基酸序列由牛种OMP25蛋白、犬种OMP25蛋白、绵羊睾丸种OMP25蛋白的氨基酸序列组成。