[发明专利]柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记及其应用和检测方法

说明书

本发明公开了一种柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记及其在柑橘木虱对甲氰菊酯敏感种群和抗性种群分类中的应用，所述分子标记为DcVGSC1_M918T突变、DcVGSC1_M918L突变或DcVGSC1_L925M突变。还公开了一种扩增分子标记的特异性引物对和所述分子标记的检测方法：先提取待测柑橘木虱的基因组DNA，以基因组DNA为模板用特异性引物对进行PCR扩增，得到扩增产物基因片段，分析PCR扩增产物是否含所述的分子标记，即可判断取待测柑橘木虱是对甲氰菊酯的敏感种群还是抗性种群。本发明首次确定了柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记，为柑橘木虱对甲氰菊酯的田间抗性提供一种快速的分子检测手段。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种分子标记，尤其涉及一种柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记及其应用和检测方法。

背景技术

柑橘木虱Diaphorina citri(Kuwayama)，是一种为害芸香科植物的刺吸式植食性害虫，由于其具有繁殖能力强、世代重叠和生活周期短等生物学特性，导致柑橘木虱易对杀虫剂产生抗药性，更重要的是，作为我国一类农作物病害——柑橘黄龙病的主要自然传播媒介而备受重视。大量杀虫剂的不科学使用，导致柑橘木虱的抗药性迅速发展，暴发成灾的态势明显上升。

甲氰菊酯是一种拟除虫菊酯类杀虫剂，在农业害虫的防控中被广泛应用。由于长期大量使用，导致害虫的抗药性快速发展。而在田间抗性监测过程中，发现柑橘木虱崇左种群的LC₅₀值达59.81mg/L，相对于敏感种群(LC₅₀：0.30mg/L)，已表现出高水平抗性，但目前还没有关于柑橘木虱对于甲氰菊酯抗性的分子标记的报道。

发明内容

本发明的目的之一是针对柑橘木虱对甲氰菊酯敏感和抗性品系分类领域的空白，提供一种柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记，所述分子标记具有核苷酸序列如SEQ IDNO.9和/或SEQ ID NO.10和/或SEQ ID NO.11所示的柑橘木虱电压门控钠离子通道基因，如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列编码的氨基酸发生DcVGSC_L925M突变，如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列编码的氨基酸发生DcVGSC_M918T突变，如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列编码的氨基酸发生DcVGSC_M918L突变，野生型柑橘木虱电压门控钠离子通道基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

野生型柑橘木虱电压门控钠离子通道基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的另一目的是提供上述的分子标记在柑橘木虱对甲氰菊酯敏感种群和抗性种群分类中的应用。

本发明的再一目的是提供一种扩增上述分子标记的特异性引物对，所述引物对为Dc_VGSC3_F/Dc_VGSC3_R，引物序列如下：

Dc_VGSC3_F：5’-GGCCTTGTTGCTTAGAGT-3’，

Dc_VGSC3_R：5’-GACGTCCTCTTTCACTCAAC-3’。

本发明的最后目的是提供一种柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记的检测方法，先提取待测柑橘木虱的总DNA，以总DNA为模板用前述的特异性引物对进行PCR扩增，得到扩增产物Dc_VGSC基因片段，分析PCR扩增产物是否含有上述的分子标记，即可判断取待测柑橘木虱是对甲氰菊酯的敏感种群还是抗性种群。

分析PCR扩增产物是否含有上述的分子标记的具体方法为:

将PCR扩增产物进行测序，与上述的柑橘木虱对甲氰菊酯抗性的分子标记进行序列比对，如果PCR扩增产物的序列与SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示的序列相同，说明检测的柑橘木虱属于甲氰菊酯抗性种群。