[发明专利]一种TSLP和/或TSLPR基因人源化的非人动物及其构建方法和应用

说明书

本发明提供了一种TSLP和/或TSLPR基因人源化的非人动物及其构建方法、一种人源化TSLP和/或TSLPR蛋白、一种人源化TSLP和/或TSLPR基因、一种TSLP和/或TSLPR基因的靶向载体和其在生物医药领域的应用，利用同源重组的方式将编码人TSLP和/或TSLPR蛋白的核苷酸序列导入非人动物基因组中，该动物体内能正常表达人或人源化TSLP和/或TSLPR蛋白，可以作为人TSLP和/或TSLPR信号机理研究、炎症、肿瘤或免疫相关疾病药物筛选的动物模型，对免疫靶点的新药研发具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于动物基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及一种TSLP和/或TSLPR基因改造非人动物模型的构建方法及其在生物医药领域的应用。

背景技术

胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin，TSLP)是一种上皮细胞来源的Ⅰ型细胞因子，属于IL-2细胞因子家族。TSLP主要在活化的肺和肠上皮细胞、角质形成细胞和成纤维细胞中表达。树突状细胞(DC)、肥大细胞和的其他免疫细胞也能产生TSLP。TSLP在免疫反应的调节和造血细胞的分化中起着重要作用。TSLP能激活小鼠体内CD4+和CD8+T细胞的表达，诱导人的B细胞增殖和分化，增强DC细胞和初始T细胞的成熟与增殖。TSLP通过与由IL-7受体α链(IL-7Rα)和TSLP受体链(TSLPR)组成的异源二聚体受体结合而发挥其生物学活性，其与共同受体γ链(γc)密切相关。

TSLPR又称为细胞因子受体样因子2(CRLF2)，是胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymicstromal lymphopoietin，TSLP)的受体，属于血细胞生成素家族。TSLPR在心脏、骨骼肌、肾脏和肝脏中有表达，在成熟树突状细胞、CD4+和CD8+T细胞、B细胞、肥大细胞、自然杀伤T细胞(NKT)中也可检测到TSLPR的表达。虽然TSLPR与TSLP的亲和力较低，但它与IL-7Rα结合后，可生成与TSLP高亲和力的结合位点，并触发信号传导。

TSLP和TSLPR表达与许多疾病相关。TSLP表达与Th2调节的过敏性疾病有关，如哮喘和特异性皮炎。研究表明在OVA诱导的气道炎症模型中，小鼠肺中的TSLP上调，而在TSLPR缺陷的小鼠中的症状却明显减轻。越来越多的证据表明，TSLP和TSLPR参与了慢性炎症、自身免疫疾病和癌症。关于TSLP/TSLPR与癌症的报道，有报道说TSLP在肿瘤微环境中，通过表达细胞因子促进肿瘤中Th2样环境的作用，促进肿瘤生长。

针对TSLP和TSLPR，目前约有40多款在研药物，适应症多集中在哮喘和特异性皮炎，研发进展最快的抗体药物Tezepelumab是一种IgG2型全人源的抗TSLP单克隆抗体，由MedImmune与安进公司合作开发。临床数据表明，该抗体药能结合并阻止TSLP与受体复合物相互作用，从而阻止免疫细胞释放促炎性细胞因子，进而防止哮喘恶化并控制哮喘。2018年，FDA正式通过Tezepelumab突破性治疗药物认定，用于治疗没有嗜酸性粒细胞表型的严重哮喘患者。目前该药正在临床Ⅲ期试验中的适应症包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)、重症哮喘和特异性皮炎。此外，研究报道，在肿瘤微环境中，作为屏障组织，TSLP诱导了单核细胞来源的树突状细胞MoDC的成熟，去除TSLP或shRNA诱导的TSLP表达下调都显著降低了乳腺癌发展、肺转移和胰腺肿瘤的生长速度。