[发明专利]一种幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原、试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原、试剂盒及其制备方法。该抗原为幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori）HPC‑025，保藏登记号CCTCC No：M20221024，保藏日期2022年7月4日，保藏单位中国典型培养物保藏中心，地址武汉大学内。该试剂盒包括所述幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原。进一步地，试剂盒的检测对象是口腔渗出液。本发明的抗原为天然抗原，具有优于Hp国际标准株11637天然抗原、日本特殊免疫研究所Hp‑Ag天然抗原和Hp‑Ag重组抗原的灵敏度。本发明的试剂盒对使用场景无显著要求，可在各级医疗机构或家庭使用，可用于幽门螺旋杆菌的家庭普查。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原、试剂盒及其制备方法。

背景技术

幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）感染的诊断方法分为侵入性和非侵入性两大类。侵入性检查是基于内窥镜和胃粘膜活检而完成，胃镜下取胃粘膜组织进行检查，检查方法有快速尿素酶实验，直接涂片、组织学检查、细菌培养和分子生物学检测（幽门螺旋杆菌分型和基因突变检测）；非侵入性幽门螺旋杆菌检测方法有尿素呼气实验、粪便幽门螺旋杆菌抗原检测和幽门螺旋杆菌血清学抗体试验。

Hp感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的病因，更是胃癌的主要致病因素。因此，Hp是迄今为止引发胃部恶性肿瘤最重要风险因子，其中腺癌是最常见类型，约占90%。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构 （WHO/IARC） 将Hp定为Ⅰ类致癌原。而在我国，幽门螺旋杆菌的感染率约为60%。

目前市场上常见的是检测血清（或血浆）中的幽门螺旋杆菌抗体，但是由于检测样本的特殊性，导致这种检测手段必须在医院完成，并不适用于普遍性筛查。对于年龄较小的儿童而言，采血会产生一定的抗拒心理，加大采样的难度，更加不适用于对儿童Hp感染的普遍性筛查。

研究资料表明，在口腔渗出液或者尿液样本中同样存在幽门螺旋杆菌抗体，且与血清检测相比具有高度的一致性。但尿液由于是代谢产物，受个人体质，饮水情况等影响较大，检测结果容易出现波动。口腔渗出液主要成分由唾液和齿龈隙液混合而成，其中由齿龈缘和颊黏膜毛细血管中血液渗透产生的齿龈隙液则含有和血液中一致的抗体和其他的血液成分，用其作为免疫检测的样本相对更为稳定。口腔渗出液幽门螺旋杆菌抗体检测的难点，在于其含有的抗体含量较低，约为血清中含量的5%-10%左右。因此，对检测试剂提出了极高的反应灵敏度。目前对于幽门螺旋杆菌抗体的检测，大多认为用于血液样本的检测，而用于尿液检测的产品，往往还需要配备其他的简易仪器进行读数，或者操作步骤比较复杂需要专业人士操作使用。而用于口腔渗出液检测的产品，目前仍是空白。

Hp菌株在不同区域，不同人群之间存在很大差异。目前市售的常用Hp重组抗原，制备过程使用的序列均来自于标准库，但其序列具有一定局限性，对于不同类型的Hp菌株检出能力差异很大。

发明内容

为了获得对不同类型的Hp菌株产生的抗体的检出能力均良好的抗原，本发明一方面提供一种幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原，所述幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原为幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori）HPC-025，保藏登记号CCTCC No：M20221024，保藏日期2022年7月4日，保藏单位中国典型培养物保藏中心，地址武汉大学内。

进一步地，所述幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原为所述幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori）HPC-025厌氧培养后，用磷酸缓冲盐溶液（PBS）离心洗涤富集，再用PBS重悬得到的菌体，是一种Hp天然抗原，命名为HPC-025天然抗原。

进一步地，洗涤与重悬用的PBS的pH均为7.0。

另一方面，本发明提供一种幽门螺旋杆菌抗体检测试剂盒，包括如上所述的幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原。