[发明专利]一种用于B细胞淋巴瘤MRD监测的基因组合、试剂盒与应用

说明书

本发明公开了一种用于B细胞淋巴瘤MRD监测的基因组合、试剂盒与应用，涉及生物医学技术领域。该基因组合能够在初诊阶段不过度依赖于疾病诊断进行基因组合的选择，并且可在MRD监测时达到足够的检测灵敏度，从而实现B细胞淋巴瘤患者的MRD早期复发监测。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，尤其是涉及一种用于B细胞淋巴瘤MRD监测的基因组合、试剂盒与应用。

背景技术

淋巴瘤是一种起源于淋巴细胞的肿瘤，包括霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)两大类。NHL又可分为B细胞起源淋巴瘤及NK/T细胞起源淋巴瘤两类。其中，最常见的NHL为B细胞起源淋巴瘤，约占70％，包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤等多种亚型。不同亚型的淋巴瘤细胞分化阶段不同，治疗方案及疾病预后也不相同。

常规淋巴瘤在进行化疗、免疫治疗等治疗后需进行微小残留病(minimalresidual disease，MRD)监测，以此评估肿瘤病灶的残留情况以及患者是否达到完全缓解(complete response，CR)。淋巴瘤目前常用的MRD监测手段包括正电子发射断层成像-X线计算机断层成像仪技术(PET-CT)、流式细胞术、数字PCR技术等，但各有其局限性。PET-CT依赖于肿瘤病灶的代谢强度进行疾病残留判断，具有误判的风险，且对人体而言具有一定的放射伤害；流式细胞术仅能针对活细胞进行测定，而多数非骨髓灶的淋巴瘤治疗后无法获取到样本进行流式细胞术的测定，淋巴瘤大部分均为非骨髓灶疾病，极大限制了流式细胞术在MRD监测中的应用；数字PCR技术虽然具有超高灵敏度和特异性，而且仅需采集患者外周血循环游离DNA(cfDNA)进行监测，但数字PCR通常仅监测单一位点，容易存在单一位点监测阴性但肿瘤仍然存在的情况。

基于近年兴起的利用二代测序(Next generation sequencing，NGS)对外周血肿瘤循环游离DNA(ctDNA)进行MRD监测相对上述方法而言具有多种优势：①无放射性伤害；②可一次性监测多个突变位点；③无创性，无需从患者身上采样；④便捷性，患者仅需于门诊开单抽血即可，而如PET-CT则需办理住院进行检测。目前，如肺癌、结直肠癌等肿瘤领域已经具有相对成熟的该类产品，但淋巴瘤领域此类产品尚为空白。基于此类方法进行淋巴瘤MRD监测时主要存在下述问题：

1.目前类似产品目前均是基于突变位点而进行的MRD监测，即检测结果为各个初诊突变位点在MRD监测时的阴性或者阳性，无法有效去除cfDNA中的背景突变所导致的假阳性干扰，从而使得检测下限只能稳定达到0.5％，大大限制了其在MRD监测时的实用性。MRD监测追求足够低的灵敏度，灵敏度越低则可越早监测到患者体内肿瘤复发，即可越早进行临床干预治疗，提高患者长期生存期。

2.基于淋巴瘤的特殊性，患者初诊时送检NGS进行MRD基线测定时往往会存在淋巴瘤亚型不明确的情况，导致了针对某一种淋巴瘤亚型(如弥漫性大B细胞淋巴瘤)的NGS引物组合(panel)无法很好地适用于患者从初诊基线建立到MRD监测整个过程，而如果将所有常见淋巴瘤基因组合成一个panel，由于MRD监测需要大量测序数据量，故会导致测序成本大量增加，使得临床实用性显著降低。

因此，需要提供一种可以有效在初诊阶段不过度依赖于疾病诊断进行基因panel选择，并且可在MRD监测时达到足够的检测灵敏度，从而实现淋巴瘤患者的MRD早期复发监测的淋巴瘤MRD监测NGS方法。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种基因组合，能够在初诊阶段不过度依赖于疾病诊断进行基因panel选择，并且可在MRD监测时达到足够的检测灵敏度，从而实现B细胞淋巴瘤患者的MRD早期复发监测。

本发明还提出一种用于B细胞淋巴瘤MRD监测的试剂盒。