[发明专利]FAM83D和FBXW7的结合位点在制备预防和/或治疗乳腺癌药物中的应用

说明书

本发明研究表明FAM83D分子通过H343/L344位点与FBXW7的173‑231区域结合；FAM83D通过与FBXW7结合抑制FBXW7二聚化，促进其泛素化降解进而下调FBXW7表达；FAM83D通过下调FBXW7促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。本发明发现在乳腺癌发生发展中的FAM83D调控FBXW7的作用机制和结合位点，为乳腺癌治疗的研究和药物靶点的设计提供了更加开阔的思路，在制备预防和/或治疗乳腺癌药物中具有重大的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体涉及FAM83D和FBXW7的结合位点在制备预防和/或治疗乳腺癌药物中的应用。

背景技术

乳腺癌，位居中国女性恶性肿瘤发病率之首，严重威胁着女性的身心健康。据统计每年全世界患者约有120万，而60万人死于乳腺癌。乳腺癌发病率高，侵袭性强，极易复发和转移，且有年轻化的趋势。而且，乳腺癌是一种异质性肿瘤，个体差异明显、发病机制复杂治疗极其困难。目前早期外科手术结合化疗为治疗乳腺癌的唯一方案。因此对乳腺癌发病过程机制的研究以帮助寻找药物靶点提高治愈率具有十分重要的意义。

FAM83D是FAM83家族中的一种有丝分裂相关蛋白，在细胞有丝分裂过程尤其是在姐妹染色单体分离、染色体赤道板聚集的过程中起着关键的作用。调查发现FAM83D在肺癌、卵巢癌、结直肠癌等多种肿瘤中呈现高表达趋势，而且这种高表达又与多数肿瘤的不良预后有关，因此FAM83D是与人类肿瘤发生发展具有密切联系的蛋白。

FBXW7属于F-box蛋白家族中的FBXW亚类，具有F-box、D-domain、WD-40 3个结构域，是泛素-蛋白酶体系统中E3泛素连接酶SCF复合物的组成成分，在蛋白泛素化降解过程中发挥底物识别的重要作用。FBXW7是一种公认的肿瘤抑制蛋白，其降解的靶蛋白多为一些在肿瘤发展中起促进作用的癌蛋白如：mTOR、notch、AURKA等。研究表明FBXW7在肺癌、胃癌、乳腺癌等多种肿瘤中均有缺失、突变或下调。

我们课题组早期研究发现在乳腺癌细胞中FAM83D蛋白表达水平显著升高，而且高表达的FAM83D促进了人乳腺癌细胞的增殖、侵袭迁移和EMT，在FAM83D促进乳腺癌发生发展的机制研究中我们了解到FAM83D与FBXW7结合并下调了FBXW7，但是这种下调的具体机制并不明确，深入研究FAM83D在肿瘤细胞中的作用机制加深了现阶段人类对肿瘤的认识，为下一步研究治疗方案、寻找药物靶点提供了新思路，创造了理论基础。

发明内容

为解决以上技术上的不足，本发明提供了FAM83D和FBXW7的结合位点，发现FAM83D与FBXW7结合并下调了FBXW7，FAM83D和FBXW7的结合位点可以在制备预防和/或治疗乳腺癌药物中的进行应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明应用了医学研究方法：

1、FAM83D分子与FBXW7结合位点的鉴定

(1)构建FAM83D分子不同截断突变体和点突变体质粒与FBXW7全长共转入HEK293T细胞中，通过免疫共沉淀和western blot技术检测FAM83D各突变体与FBXW7的结合。

(2)将Flag-vector、Flag-FAM83D-WT、Flag-FAM83D-H343R/L344A分别转入MCF7细胞中，并提取细胞总蛋白，Western blot检测FBXW7及其下游靶蛋白水平。

(3)采用逆转录病毒感染方法构建FAM83D过表达细胞系MCF7(MCF7-pBabe-FAM83D、MCF7-pBabe-FAM83D-H343R/L344A)及对照细胞系(MCF7-pBabe-ctrl)，嘌呤霉素筛选后，western blot检测FAM83D的表达。

(4)应用上述构建的细胞系通过MTT及平板克隆形成实验检测FAM83D通过H343R/L344A位点对细胞增殖能力的影响。