[发明专利]一种UGT1A1-纳米二氧化硅复合物的制备方法及其应用

说明书

本发明属于医药技术领域，提供一种UGT1A1‑纳米二氧化硅复合物的制备方法及其应用；使用纳米二氧化硅材料为载体，对使用昆虫细胞体系重组的人UGT1A1，包括UGT1A1*1及其编码区突变体进行固定化，形成新型UGT1A1‑纳米二氧化硅复合物，纳米二氧化硅材料为纳米二氧化硅颗粒材料或表面金属修饰的纳米二氧化硅颗粒材料；该复合物制备简便，可多次重复使用，并可应用于经由UGT1A1代谢的药物的代谢性质及药物‑药物相互作用的体外评价，缓解了代谢酶的来源受限这一问题，同时降低研究成本。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及到使用纳米二氧化硅(SiO₂)材料作为载体固定化药物代谢II相酶UGT1A1(包括野生型和该酶的常见编码区突变体)，及其在药物代谢、清除和药物-药物相互作用的体外评价中的应用。

背景技术

体外评价待测药物是否经由药物代谢酶代谢或药物是否对药物代谢酶有抑制作用，是临床前新药研发的重要环节。UGT1A1是表达于肝光面内质网膜上的重要的药物代谢II相酶，参与了包括7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38，为伊立替康的活性形式)和胆红素等在内的多种药物及内源性化合物的代谢。UGT1A1的基因多态性是导致药物代谢个体差异的重要原因。

目前体外对人UGT1A1活性评价的可靠的体系包括来自人肝组织的人肝微粒和人原代肝细胞，以及重组人源单酶等。但人肝组织来源有限，且来自UGT1A1编码区突变个体的肝组织更难获得。重组人UGT1A1及其突变体的生产成本高，价格昂贵。同时，肝组织制品和重组UGT1A1只能一次性使用，进一步提高了研究成本。

酶水凝胶包埋法固定化酶系统(中国专利CN104342427A，用于药物代谢及药效、毒性评价的代谢酶-水凝胶体系)存在的问题是底物需要进入水凝胶才能与酶接触，需要较长的传质时间。分子筛和介孔材料吸附法固定化酶系统(中国专利CN202111286602.4，一种制备药物代谢酶-多孔材料复合物的方法及应用)也存在底物进入和产物流出多孔的过程，影响对酶促反应动力学的准确定量。此外，共价结合法在酶分子与载体共价结合的过程可能造成酶活性的损失，同样影响酶促反应动力学的准确定量。

因此建立UGT1A1的重复利用的方法，并将其应用于药物代谢及药物-药物相互作用的体外评价，是UGT1A1体外代谢研究的一种改进和创新。

发明内容

本发明针对上述存在的技术问题提供一种UGT1A1-纳米二氧化硅复合物的制备方法及其应用。该复合物制备简单，可多次重复使用于UGT1A1及其常见编码区突变体的代谢活性的体外评价。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种UGT1A1-纳米二氧化硅复合物，包括UGT1A1和纳米二氧化硅材料，以纳米二氧化硅材料为载体，对UGT1A1进行固定化。

优选的，所述UGT1A1为UGT1A1*1或UGT1A1*6或UGT1A1*6编码区突变体。

优选的，所述纳米二氧化硅材料为纳米二氧化硅颗粒材料或表面金属修饰的纳米二氧化硅颗粒材料。

一种UGT1A1-纳米二氧化硅复合物的制备方法，所述制备方法如下：

步骤S1：用磷酸盐缓冲溶液清洗纳米二氧化硅材料；

步骤S2：将UGT1A1的微粒体加入到用磷酸盐缓冲溶液清洗的纳米二氧化硅材料中；

步骤S3：将步骤S2中混合物混匀后静置，离心，用磷酸盐缓冲溶液洗去未结合的UGT1A1，获得UGT1A1-纳米二氧化硅复合物。

优选的，所述步骤S1的具体步骤如下：将纳米二氧化硅材料于磷酸盐缓冲液浸泡30min，6000rpm离心5min，弃上清，磷酸盐缓冲液重悬沉淀，保留沉淀备用。

优选的，所述步骤S1中磷酸盐缓冲溶液和步骤S2中磷酸盐缓冲溶液均为100mM，pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液。