[发明专利]一种调控玉米雄穗分枝数的方法在审
| 申请号： | 202211146740.7 | 申请日： | 2022-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN115948458A | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 刘琳;张睿;宋巧巧 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/00;A01H6/46;C12N15/113 |
| 代理公司： | 深圳尚业知识产权代理事务所(普通合伙) 44503 | 代理人： | 王利彬 |
| 地址： | 518000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 调控 玉米 分枝 方法 | ||
1.一种调控玉米雄穗分枝数的方法，其特征在于，包括：
利用T-DNA插入转基因技术构建了两个串联重复的发卡结构的miR529过表达载体；
通过农杆菌EHA105株系将miR529过表达载体转入玉米自交系C01的不成熟胚中得到多个转基因事件；
对多个转基因事件分别通过PCR进行验证，并通过Northern blotting的方法挑选miR529在雄穗中表达量升高的独立事件。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发卡结构的miR529过表达载体包括：使用玉米泛素基因UBI驱动的人工miRNA结构和使用增强CaMV 35S启动子驱动的BAR基因结构。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述利用T-DNA插入转基因技术构建了两个串联重复的发卡结构的miR529过表达载体，包括：
在pOT2-Polycis-UN载体中，将两个串联重复的具有发卡结构的miR529克隆到玉米泛素基因UBI启动子下游主干中。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括：
对发卡结构的miR529过表达载体进行测序验证，并将所得的pOT2-Polycis-UN载体经PacI和MluI限制性内切酶进行双重消化；
将消化后回收的UBI-miR529-NOS片段克隆到pZZ00026-PM的二元载体中；
将经Sanger测序验证的二元载体导入农杆菌菌株EHA105。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在构建miR529过表达载体时采用的引物为：OE529-f和OE529-r。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，OE529-f的序列为：GTCGACTCTAGAGGATCCAAGCT。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，OE529-r的序列为：AGAGAGCGTACAGCCTCCAATCC。
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