[发明专利]一种高甲醇转化率且高蛋白的毕赤酵母菌株及其制备方法

说明书

本发明属于微生物领域和生物技术领域，公开了一种高甲醇转化率且高蛋白的毕赤酵母菌株及其制备方法。所述菌株是具有鲁棒性、高甲醇转化率且高蛋白的巴斯德毕赤酵母菌株(P.pastoris)HTX‑330，保藏编号为CGMCC NO.25207，其能够在33℃条件下，以甲醇为唯一碳源实现高生物量生长以及高蛋白表达，具有绿色、环保、无污染、表达率高以及成本低等优势。

技术领域

本发明属于微生物领域和生物技术领域，具体涉及一种高甲醇转化率且高蛋白毕赤酵母菌株的制备方法。

背景技术

随着我国蛋白饲料原料进口量的不断提高，蛋白饲料原料创新保障畜牧养殖业健康发展成为养殖业重要挑战，寻找和开发新的蛋白质资源成为饲料工业急需解决的问题。

根据蛋白质饲料来源不同可分为植物性蛋白饲料、动物性蛋白饲料、微生物蛋白（SCP、单细胞蛋白）饲料和非蛋白饲料。植物性蛋白饲料原料以豆粕、棉籽粕、菜籽粕、花生粕、苜蓿、玉米加工的副产品玉米蛋白粉等草本饲料为主，动物性蛋白饲料原料有鱼粉、肉骨粉、羽毛粉等，微生物蛋白饲料是由单细胞生物个体组成的蛋白质含量较高的饲料，如酵母菌饲料和单细胞藻类饲料，非蛋白氮饲料一般指饲料用尿素等。伴随着饲料行业的迅速发展，饲料也逐渐向低药、低残留的趋势发展，微生物发酵蛋白饲料的发展呈现一片生机，微生物发酵蛋白饲料能够使饲料中的大分子物质和营养物质分解转化为易消化、吸收和利用的小分子物质、小肽等，可溶性蛋白的增加，增加了蛋白的消化利用率，有效降解抗营养因子，提高了蛋白饲料的营养水平和利用效率，也间接增加了优质蛋白供给，缓解了蛋白饲料原料的供应不足，提高动物的生产性能。

甲醇是一种平台化工品，可由劣质煤炭制取，我国煤炭储量丰富，因此甲醇原料价格低廉且来源充足。另外，甲醇可由CO₂加氢大量制备，因此其被认为是“液态阳光”战略的理想能量储存载体。我国甲醇市场规模居世界第一，产能已达8000万吨/年，呈现过剩趋势，甲醇经济的发展急需配套的甲醇转化利用技术。近年来，随着合成生物学技术的不断发展及其应用领域的不断扩大，以甲醇为碳源，利用微生物转化单细胞蛋白的技术逐渐受到关注。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是自然界中存在的一种能够利用甲醇作为唯一碳源和能量来源的微生物，是甲醇生物转化单细胞蛋白的理想宿主。然而，毕赤酵母天然甲醇代谢途径复杂，甲醇转化利用率低，并且毕赤酵母菌株在工业发酵过程中鲁棒性通常较差，例如不耐高温，需要进行物理降温，最终提高发酵成本。因此，显著提高甲醇转化效率及发酵过程中的鲁棒性将成为利用毕赤酵母进行甲醇生物转化单细胞蛋白研究的关键所在。

发明内容

本发明的目的在于构建一株高甲醇转化效率并且高蛋白的毕赤酵母菌株。

为了克服现有技术不足，本发明提供了一株具有鲁棒性、高甲醇转化率且高蛋白的巴斯德毕赤酵母菌株(P. pastoris) HTX-330。HTX-330菌株的出发菌株来源于实验室保藏菌株P. pastoris X-33。HTX-330能够在33℃条件下，以甲醇为唯一碳源实现高生物量生长以及高蛋白表达，具有绿色、环保、无污染、表达率高以及成本低等优势。

本发明提供一种高甲醇转化率且高蛋白的毕赤酵母菌株HTX-33，其保藏编号为CGMCC NO.25207。其是由野生型P. pastoris X-33驯化迭代培养筛选得到。

同时提供，所述的毕赤酵母菌株在微生物蛋白或饲料生产中的应用。优选地，其中用甲醇作为唯一碳源和能量来源发酵所述毕赤酵母菌株。