[发明专利]一株肠源凝结魏茨曼氏菌RS804及其应用

权利要求书

1.一株肠源凝结魏茨曼氏菌(Weizmannia coagulans)RS804，其特征在于，所述肠源凝结魏茨曼氏菌RS804于2022年8月10日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCCNo:62692，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

2.如权利要求1所述的肠源凝结魏茨曼氏菌在发酵中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肠源凝结魏茨曼氏菌用于发酵生产L-乳酸。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：将所述肠源凝结魏茨曼氏菌接种于以甜菜蔗糖为主要碳源的发酵培养基中，通过发酵生产L-乳酸。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述以甜菜蔗糖为主要碳源的发酵培养基包括以下质量体积百分含量的成分：0.25％酵母膏、5％甜菜糖蜜、0.05％磷酸氢二钾、0.025％磷酸二氢钾、0.18％磷酸二氢铵、0.5％硫酸铵、0.01％硫酸锌、0.02％叶酸、0.02％生物素和10.0％碳酸钙，以及以下体积百分含量的成分：75％甜菜液糖；去离子水补足余量。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述发酵生产L-乳酸的过程为：50-55℃静置培养40-48h。

7.如权利要求4所述的应用，其特征在于，还包括菌株活化、摇瓶种子培养以及种子扩大培养的过程。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述菌株活化的过程为：将所述肠源凝结魏茨曼氏菌接种至改良的MRS琼脂培养基斜面，50-55℃培养48h；再用无菌生理盐水洗下斜面菌株，制备菌悬液，转接于含有改良MRS培养基的培养基中，50-55℃培养24h。

所述摇瓶种子培养的过程为：将活化培养得到的菌种加入无菌水洗脱制备菌悬液，转接于装有改良的MRS培养基的摇瓶中，100-150r/min，50-55℃振荡培养12-18h，然后再50-55℃静置培养12-18h。

所述种子扩大培养的过程为：种子摇瓶按接种量20％移接含有种子培养基的种子罐，在罐压为0.06Mpa的条件下，50-55℃，100-150r/min搅拌培养6-10h，然后停止搅拌，保持罐体正压，继续50-55℃静置培养12-18h，移种标准为菌落数＞10⁹CFU/mL；

所述改良的MRS培养基含有以下质量体积百分含量的组分：1％蛋白胨，1％牛肉膏、0.5％酵母膏、0.2％柠檬酸氢二铵、0.5％乙酸钠、0.2％磷酸氢二钾、0.06％硫酸镁、0.025％硫酸锰、0.6％碳酸钙，以及以下体积百分含量的组分：75％甜菜液糖和0.1％的吐温-80；pH值6.5左右，去离子水补足余量；

所述改良的MRS琼脂培养基为在所述改良的MRS培养基基础上加入以下质量体积百分含量的组分：2％的琼脂粉；

所述种子培养基含有以下质量体积百分含量的组分：1.5％酵母膏、0.2％磷酸二氢铵、0.5％硫酸铵、1.0％轻质碳酸钙、0.02％硫酸镁、0.01％硫酸锌，以及以下体积百分含量的组分：75％甜菜液糖；调节pH值为6.0-6.5，去离子水补足余量。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述发酵过程为：将移种量为20-50％种子培养液移种至装有发酵培养基的发酵罐，控制发酵罐通气量为150-200mL/min，初始总糖的浓度控制在100-160g/L，pH值为5.5-6.0，50-55℃静置培养；维持发酵罐中的总糖含量在16-20g/L，发酵罐内正压，发酵48h。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，发酵过程中调节pH的方法为通过控制流加25％的石灰乳控制。