[发明专利]无丙二酸柠檬酸杆菌及其在引诱橘小实蝇中的应用

说明书

本发明公开了无丙二酸柠檬酸杆菌及其在引诱橘小实蝇中的应用。本发明新发现的橘小实蝇共生菌‑无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)可用于制备对重大果蔬害虫橘小实蝇尤其是其雌虫具有特异诱集效果的引诱剂，该引诱剂制作成本低，诱杀效果好，对环境及非靶标生物无害，具有非常大的应用前景。

技术领域

本发明属于害虫的绿色防治技术领域，具体涉及无丙二酸柠檬酸杆菌及其在引诱橘小实蝇中的应用。

背景技术

双翅目(Diptera)实蝇科(Tephritidae)寡鬃实蝇亚科(Dacinae)的橘小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)，俗称“针蜂”，起源于亚洲地区，是世界检疫性害虫。自1911年中国台湾首次报道以来，该虫已从我国东南沿海地区逐渐扩展到多个省市，且有进一步北移扩张的趋势。橘小实蝇的寄主范围广，能够为害多达46科的果蔬作物。该虫具有极强的繁殖力，单头雌虫一生可产卵400～1800粒。雌虫产卵于水果内部，卵孵化后，幼虫取食使果实腐烂或变黄脱落，造成果蔬产业严重的经济损失。

目前市面上使用最广泛的橘小实蝇引诱剂-甲基丁香酚只能诱杀雄虫，而用于诱杀雌虫的诱剂则很少，且效果很差。

发明内容

本发明的目的在于开发出一种对环境友好、使用简便、成本低廉且尤其是对橘小实蝇雌虫具有很好引诱效果的无丙二酸柠檬酸杆菌及利用该菌制备的引诱剂，可用于诱杀橘小实蝇。

本发明从橘小实蝇卵巢中分离出的无丙二酸柠檬酸杆菌BD对橘小实蝇雌虫有引诱作用。在橘小实蝇的寄主果实果肉或市面上购买的果汁中添加该菌菌体后可显著提高对橘小实蝇雌虫的诱集效果。因此利用该菌菌体加橘小实蝇的寄主果实进行发酵可实现制作雌虫引诱剂的目的。本发明使用到的原料对环境无污染，成本低，具有非常大的开发潜力；可诱杀橘小实蝇雌虫是其一大特点，对保护果蔬生产具有非常大的作用。

因此，本发明的第一个目的是提供一株无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacteramalonaticus BD)，其保藏编号为GDMCC NO.62161。

本发明的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)的形态特征为：在LB培养基上的菌落光滑、湿润，菌落中心不透明、边缘半透明，浅灰黄色，有点发白，表面有光泽，边缘整齐。

该菌的分子鉴定依据：

16S rRNA序列分析：取该菌扩繁菌液进行PCR扩增，引物为细菌16S rRNA通用引物1492R及27F，PCR产物经测序后使用MEGA6.0对测序序列进行拼接，拼接后的序列如SEQ IDNO.1所示，拼接结果在NCBI上进行比对分析，比对结果表明该菌株为无丙二酸柠檬酸杆菌。

该菌的生化鉴定依据：

利用肠杆菌科细菌生化编码鉴定管GYZ-15e(17种)及肠杆菌科细菌编码册第二代GYZ-15eDO16，根据其附带的单盒生化鉴定管使用说明进行生化鉴定；该菌株鉴定值为07325，根据肠杆菌科细菌编码册第二代GYZ-15eDO16检索，得到结果为无丙二酸柠檬酸杆菌，其鉴定值为96.607％。

本发明的第二个目的是提供所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacteramalonaticus BD)在引诱橘小实蝇中的应用。

优选，所述的橘小实蝇为橘小实蝇雌虫。

本发明的第三个目的是提供一种橘小实蝇引诱剂，包含所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD与适宜于该菌的发酵底物。

优选，所述的橘小实蝇引诱剂，包含所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacteramalonaticus BD)与橘小实蝇寄主果实，或包含所述的无丙二酸柠檬酸杆菌BD(Citrobacter amalonaticus BD)与橘小实蝇寄主果实的加工制品。