[发明专利]一种与绵羊体尺相关的分子标记、其检测方法及应用

说明书

本发明提供了一种与绵羊体尺相关的分子标记、其检测方法及应用。本发明通过对绵羊AGO2基因进行PCR扩增和序列分析，发现在扩增片段的第306位、存在一个C/A多态性位点，进一步使用KASPar引物对1276只绵羊的多态性位点进行检测和建立最小二乘模型，对基因型与生长性状进行关联分析，最终确定了本发明扩增的AGO2基因片段可以作为与绵羊体尺相关的分子标记。本发明通过检测分子标记，选留CC纯合的绵羊进入核心群，以提高绵羊的体尺性状，有助于增加经济效益。

技术领域

本发明属于分子标记的技术领域，具体涉及AGO2基因片段作为影响绵羊体尺的分子标记、其检测方法及应用。

背景技术

湖羊是著名的多产品种，四级发情，生长快，性成熟早等优秀性状(X.Feng et al，2018)。湖羊主要分布在江苏、浙江和上海。错义突变发生在编码区，导致翻译缺陷蛋白，并与许多疾病有关(Lee et al.，2008)。同义突变在非编码区域并不产生改变的蛋白质，而是改变DNA和RNA序列，有被视为沉默突变，因此很容易被忽略(Sharma et al.)。然而，同义突变可以改变mRNA的稳定性、剪接调节位点、miRNA结合位点或翻译效率，从而导致蛋白质水平或蛋白质构象的改变(SaunaKimchi-Sarfaty，2011)。

Argonaute RISC催化组分2(AGO2)是RNA诱导沉默复合物的主要组分。人类AGO家族包括四种不同的人类蛋白质：AGO1、AGO2、AGO3和AGO4(J et al，2008年)。虽然它们有很强的同源性，但已经证明只有AGO2具有翻译后修饰的效果。它不仅可以维持miRNA的稳态(Chen et al，2021)，还可以在一定程度上改变miRNA的活性(Zhang et al，2019年)。AGO2基因在体内广泛表达。视网膜中AGO2的破坏将导致视网膜变性(Chen et al，2021)。肝脏中的AGO2会影响小鼠的能量代谢、脂质代谢和糖代谢功能，进而影响小鼠的肥胖和脂肪沉积(Zhang，2018)。因此可以认为AGO2在生物发育中起着不可或缺的作用。AGO2基因虽然在现有研究中证实与脂肪的沉积相关，但是在生产实践中并没有明确地证明该基因能够改变绵羊的生长性状。

因此，为研究影响绵羊体尺生长的分子调控机制，寻找与体尺相关的分子标记，本发明分析了AGO2基因对绵羊部分体尺性状的影响，以促进绵羊朝向高生长性状方向的选育，为高生长性状肉羊的育种提供依据，具有重要的理论价值和现实意义。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种作为与绵羊体尺(绵羊胸围与管围)相关的分子标记及其应用。本发明的分子标记是从绵羊AGO2基因中扩增得到，其具体核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。通过扩增绵羊AGO2基因的DNA序列并测序，寻找AGO2基因的多态性位点，分析不同的基因型与绵羊体尺相关性，并建立含多态性位点的分子标记的检测方法，并可将该分子标记应用于培育快速生长的绵羊新品种中。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：

本发明一方面提供了一种与绵羊体尺相关的分子标记，该分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其中第306bp位的M表示C或A，由于上述序列在第306位碱基处有一个C/A突变，从而导致了绵羊AGO2基因在该位点的C/A多态性。

本发明的第二方面提供了一种检测上述分子标记的引物对，任何可特异性扩增本发明上述分子标记或包含上述多态性位点的片段的引物均适用于对该分子标记进行检测，优选地，所述检测上述分子标记的引物对包括上游引物M-F和下游引物M-R，上游引物M-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物M-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。