[发明专利]一种基于受体结合检测新冠病毒的方法在审
申请号: | 202211114309.4 | 申请日: | 2022-09-14 |
公开(公告)号: | CN115541876A | 公开(公告)日: | 2022-12-30 |
发明(设计)人: | 孟哲峰;杜玲 | 申请(专利权)人: | 上海市闵行区中心医院 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/543;C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93 |
代理公司: | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人: | 周一新 |
地址: | 201100 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 受体 结合 检测 病毒 方法 | ||
1.一种基于受体结合检测新冠病毒的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制备受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球:以交联琼脂糖为基质,通过羧基表面修饰后得到琼脂糖磁性微球,与受体蛋白以共价偶联方式结合形成受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球;
(2)受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球捕获新冠病毒:所述受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球表面共价结合的受体蛋白识别新冠病毒样本外膜S蛋白RBD区域,两者相互结合模拟新冠病毒与宿主细胞的结合过程捕获新冠病毒;
(3)受体蛋白偶联琼脂糖磁性微球捕获新冠病毒后,依次经过磁性微球清洗、纯化和洗脱,得到具备细胞结合能力的新冠病毒;
(4)通过免疫结合-荧光定量PCR联合检测上述具备受体结合能力的新冠病毒,评估其感染活性和传播能力。
2.根据权利要求1所述基于受体结合检测新冠病毒的方法,其特征在于,所述受体蛋白选自肝素蛋白或ACE2重组蛋白。
3.根据权利要求2所述基于受体结合检测新冠病毒的方法,其特征在于,所述受体蛋白为来源于猪小肠粘膜的肝素蛋白。
4.根据权利要求3所述基于受体结合检测新冠病毒的方法,其特征在于,所述基于受体结合检测新冠病毒的方法包括:
(a)制备肝素化磁性微球:以交联琼脂糖为基质,通过羧基表面修饰后得到琼脂糖磁性微球,与所述肝素蛋白以共价偶联方式结合形成肝素化磁性微球;
(b)肝素化磁性微球捕获新冠病毒:所述肝素化磁性微球表面共价结合的肝素识别新冠病毒样本外膜S蛋白RBD区域,两者相互结合模拟新冠病毒与宿主细胞的结合过程捕获新冠病毒;
(c)所述肝素化磁性微球捕获新冠病毒后,依次经过磁性微球清洗、纯化和洗脱,得到具备细胞结合能力的新冠病毒;
(d)通过免疫结合-荧光定量PCR联合检测上述具备受体结合能力的新冠病毒,并评估其感染活性和传播能力。
5.根据权利要求1所述基于受体结合检测新冠病毒的方法,其特征在于,所述新冠病毒样本来源于新冠病毒感染者或新冠病毒感染治愈后复阳患者的体外组织或血液。
6.权利要求1–5任一项所述基于受体结合检测新冠病毒的方法在评价受试者体内新冠病毒感染活性和传播能力方面的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述受试者包括新冠病毒感染者和新冠病毒感染治愈后复阳患者。
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