[发明专利]一种融合蛋白、生长激素及其制备方法

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，包括第一肽段和第二肽段，所述第一肽段为目标生长激素及其片段，所述第二肽段具有如式(I)所示的氨基酸序列，所述第一肽段的N端与所述第二肽段的C端相连；

MXB(I)；其中，M为甲硫氨酸，X为保护序列，B为酶切位点；

所述融合蛋白适于通过切割酶切割形成游离的所述目标生长激素及其片段，所述目标生长激素及其片段不被所述切割酶切割，游离的所述目标生长激素及其片段的N-末端不含有额外的氨基酸残基。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述酶切位点的序列为DDDDK。

3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述保护序列包含1～25个氨基酸；

优选地，所述保护序列包含1～15个氨基酸，优选为1～10个；

更优选地，所述保护序列包含3个氨基酸；

优选地，所述保护序列中氨基酸各自独立地为空、F、T和P；

优选地，所述保护序列的氨基酸序列为FTP；

任选地，所述第二肽段具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述目标生长激素及其片段具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有99％、98％、97％、96％和95％同一性的氨基酸序列。

5.一种制备生长激素的方法，其特征在于，包括：

获取菌体的包涵体，所述包涵体包括融合蛋白，所述融合蛋白包括第一肽段和第二肽段，所述第一肽段为目标生长激素及其片段，所述第二肽段具有如式(I)所示的氨基酸序列，所述第一肽段的N端与所述第二肽段的C端相连；

将所述融合蛋白通过切割酶进行酶切处理，形成游离的所述目标生长激素及其片段，所述目标生长激素及其片段不被所述切割酶切割，游离的所述目标生长激素及其片段的N-末端不含有额外的氨基酸残基；

MXB(I)；其中，M为甲硫氨酸，X为保护序列，B为酶切位点。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酶切位点的序列为DDDDK；

优选地，采用重组牛肠激酶对所述融合蛋白进行酶切处理；

优选地，所述酶切处理是在1～10℃、pH值为8.0～8.2条件下进行11～19h；

任选地，所述重组牛肠激酶和所述融合蛋白的质量比为1：(2000～6000)，优选为1：(3000～5000)。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述保护序列包含1～25个氨基酸；

优选地，所述保护序列包含1～15个氨基酸，优选为1～10个；

优选地，所述保护序列中氨基酸各自独立地为空、F、T和P；

优选地，所述保护序列的氨基酸序列为FTP；

任选地，所述第二肽段具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述菌体为大肠杆菌；

任选地，所述目标生长激素及其片段为人生长激素或其片段；

任选地，所述第一肽段具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有99％、98％、97％、96％和95％同一性的氨基酸序列。