[发明专利]一种病毒单克隆抗体VP4-1G2及病毒检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种病毒单克隆抗体VP4‑1G2及病毒检测试剂盒。本发明针对轮状病毒的国内和国际的主要流行株的VP4氨基酸序列，采用Kolaskar‑Tongaonka预测较好的抗原表位设计并制备了相应的抗原表位肽，以该表位肽免疫小鼠制备获得了相应的单克隆抗体，该抗体具有较好的结合VP4抗原多肽以及轮状病毒的能力，并且将所述抗体制备成为相应的试纸条后也具有较好的检测下限，临床应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及生物领域，更具体的涉及病毒检测领域，具体的涉及一种病毒单克隆抗体VP4-1G2及病毒检测试剂盒。

背景技术

感染性腹泻是一组由多种病毒、细菌、寄生虫等引起的急性肠道传染病，其中轮状病毒(Rotavirus，RV)是引起成年人和儿童尤其是婴幼儿急性胃肠炎的重要病原体，给婴幼儿和儿童家庭带来较大的经济负担。轮状病毒性腹泻症状：初期常伴有感冒症状，如鼻塞、流涕，大多数患儿还会有低热；部分患儿会出现呕吐，呕吐会持续2-3天；随后患儿大便次数增多，每日10次左右，大便呈白色、黄色或浅绿色蛋花汤样，带少许粘液或脓血，无特殊腥臭味；腹泻重者可出现脱水症状，如明显口渴、尿量较少、烦躁不安、精神萎靡等；除胃肠道症状外，近年的研究发现，轮状病毒可引起许多其他疾病，有些病例可出现不同程度肝功能损害，轮状病毒甚至可通过胃肠道屏障造成病毒血症。轮状病毒性腹泻属于自限性疾病，病程一般为7天，有可能到达10天。轮状病毒性腹泻的治疗：目前尚无特效药物，一般是对症治疗，纠正孩子的脱水和酸中毒。如果宝宝症状比较轻微，没有严重的脱水表现，家长可以在家里给宝宝吃蒙脱石散、益生菌，补充一些口服补液盐。蒙脱石散和益生菌最好不要同时吃。因为蒙脱石散的吸附性很高，如果蒙脱石散和益生菌同时吃，会干扰药效。一般建议这两种药间隔两个小时服用比较好。有严重腹泻，脱水症状的患儿应及时到医院就诊。

因此，及时检测和发现轮状病毒，是有效防治的重要手段。常用于检测和诊断RV的方法有：电镜法(DEM)、酶联免疫吸附法(ELISA)、乳胶凝集试验、RT-PCR法等。DEM是最早用于粪便中BRV的检测方法，是实验室诊断病毒的常规方法。可直接观察到RV颗粒，结果可靠。但是，电子显微镜的成本较高，并且需要专业的维护以及相关的技术人员，这种方法无法广泛应用。另一方面，该方法灵敏性差，对病毒粒子数有一定的要求，每毫升病毒至少有106个病毒粒子才能进行检测。还有粪便中病毒粒子形态也会影响电镜结果，因此，该方法并不适用于大规模的样品检测。目前，适合于轮状病毒生长繁殖的细胞系比较少见。目前只有A群RV能够适应细胞培养，其他RV繁殖只能通过易感动物为模型来实现。并且RV在细胞中的复制和传代前，需要胰酶处理，病毒经胰酶激活后才能够实现在细胞培养中的复制和传代。此方法操作繁琐，培养条件要求较高，花费时间较长，所以分离培养的方法亦不适合广泛用于临床检测。轮状病毒是由11个双链RNA片段组成的无包膜二十面体病毒结构，根据病毒内层衣壳蛋白VP6的基因变异和血清特异性抗原可分为A、B、C、D、E、F、G和H组，其中A～C组可感染人类。根据病毒外壳蛋白VP7和VP4的核苷酸序列差异，A组轮状病毒至少可分为28个G基因型和39个P基因型，G/P基因型组合可以作为轮状病毒分子流行病学监测的标志物。CN113215309A提供一种检测轮状病毒G9型野毒株与G5型疫苗株的PCR引物及检测方法与试剂盒，针对PoRVG9型ICB2185株(GenBankNo.AF192267.1)和PoRVG5型OSU株(GenBankNo.KR052760.1)的vp6基因保守核苷酸序列设计引物，用于检测及鉴定PoRVG9型野毒株和G5型疫苗株。临床上可高效区分G9型野毒株及G5型疫苗株，引物和检测方法能快速高效的检测鉴定PoRVG9型野毒株和G5型疫苗株，特异性好，灵敏度高且检测方法操作简便，便于临床检测及区分G9型野毒株和G5型疫苗毒株，且有利于开展流行病学调查，具有很大的应用前景。RT-PCR是最常用的分子生物学技术之一，该方法是在体外模拟体内的基因复制过程。通过变性、退火和延神的循环来完成核酸分子的大量扩增。虽然PCR方法特异性强，灵敏性高，但容易污染，导致假阳性的结果，而且特异性的使用PCR仪不能快速方便的就地检测并且结果也不是立等可取。