[发明专利]一种抗CD40纳米抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种抗CD40纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括框架区和互补决定区；所述互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3，氨基酸序列如下：其中，所述互补决定区CDR1序列为SEQ IDNO.1，所述互补决定区CDR2序列为SEQ ID NO.2，所述互补决定区CDR3序列为SEQ ID NO.3；或者所述互补决定区CDR1为SEQ ID NO.4，所述互补决定区CDR2为SEQ ID NO.5，所述互补决定区CDR3为SEQ ID NO.6；或者所述互补决定区CDR1为SEQ ID NO.1，所述互补决定区CDR2为SEQ ID NO.7，所述互补决定区CDR3为SEQ ID NO.8；或者所述互补决定区CDR1为SEQID NO.9，所述互补决定区CDR2为SEQ ID NO.10，所述互补决定区CDR3为SEQ ID NO.11；或者所述互补决定区CDR1为SEQ ID NO.12，所述互补决定区CDR2为SEQ ID NO.13，所述互补决定区CDR3为SEQ ID NO.14；或者所述互补决定区CDR1为SEQ ID NO.12，所述互补决定区CDR2为SEQ ID NO.15，所述互补决定区CDR3为SEQ ID NO.16；或者所述互补决定区CDR1为SEQ ID NO.17，所述互补决定区CDR2为SEQ ID NO.18，所述互补决定区CDR3为SEQ IDNO.19；或者所述互补决定区CDR1为SEQ ID NO.9，所述互补决定区CDR2为SEQ ID NO.20，所述互补决定区CDR3为SEQ ID NO.21。

2.如权利要求1所述的抗CD40纳米抗体，其特征在于，所述抗CD40纳米抗体具有选自以下任一种的氨基酸序列：SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25、SEQID NO.26、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29。

3.如权利要求2所述的抗CD40纳米抗体，其特征在于，编码所述纳米抗体氨基酸序列的核苷酸序列为下列序列之一：SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.37。

4.一种分子表达载体，其特征在于，所述载体包含权利要求3所述SEQ ID NO.30~SEQID NO.37的核苷酸序列中的一种。

5.一种含有权利要求4所述分子表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述细胞为哺乳动物细胞、大肠杆菌、酵母菌中的一种。

6.一种权利要求1-3任一项所述抗CD40纳米抗体的制备方法，其特征在于，制备过程如下：

S1、依据CD40的蛋白序列和基因序列信息，分析并设计可有效诱导羊驼产生针对humanCD40的特异性抗体的抗原；

S2、用步骤S1获得的抗原与弗氏完全佐剂的混合液对羊驼进行免疫，获得羊驼PBMC细胞；

S3、以步骤S2获得的羊驼PBMC细胞为原材料，提取RNA，并反转录成cDNA，经PCR获得目的基因片段，然后将目的基因片段克隆至载体中，并导入大肠杆菌，构建Anti-CD40-VHH噬菌体文库；

S4、从步骤S3获得的Anti-CD40-VHH噬菌体文库中筛淘抗CD40的纳米抗体，并进一步对筛选出的噬菌体单克隆进行抗原结合分析，获得CD40/His阳性克隆；

S5、对步骤S4获得的CD40/His阳性克隆经初筛、真核表达纯化、ELISA结合验证，筛得抗CD40抗体。

7.权利要求1-3任一所述抗CD40纳米抗体在制备Ⅰ型跨膜蛋白检测试剂盒中的应用。

8.一种Ⅰ型跨膜蛋白检测试剂，其特征在于，包含权利要求1-3任一所述的抗CD40纳米抗体。

9.一种权利要求1所述抗CD40纳米抗体在制备治疗癌症药物组合物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述癌症包括实体肿瘤及血液系统肿瘤。