[发明专利]一种微生物发酵制备γ-氨基丁酸的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵制备γ-氨基丁酸的方法，其特征在于：将L-谷氨酸在磷酸吡哆醛辅酶、维生素B6辅酶、半胱氨酸酶激活剂、缓存液的存在下与L-谷氨酸脱羧酶固定化酶进行催化反应，得到γ-氨基丁酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：磷酸吡哆醛辅酶、维生素B6辅酶、半胱氨酸酶激活剂的质量比为1:2-5:5-10。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：磷酸吡哆醛辅酶与缓冲溶液的质量体积比为1:5000-10000。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述催化反应的反应温度为30-45℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述催化反应的反应pH为4.0-6.0。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在反应过程中，可选加入消泡剂以处理反应过程中产生的泡沫。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述L-谷氨酸脱羧酶可选通过分离纯化得到，所述分离纯化方法为将湿菌体与牛血清蛋白溶液混合，超声破碎，收集上清液，得到L-谷氨酸脱羧粗酶液；将制备好的粗酶液置于冰水浴中，添加硫酸铵进行盐析得到L-谷氨酸脱羧酶沉淀精品。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述牛血清蛋白溶液浓度为：50-200ug/ml,与湿菌体的体积质量配比(L/kg)为20:1-5。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述湿菌体可通过以下方法得到:菌种斜面活化、种子培养和发酵培养。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述乳杆菌可选为乳酸乳杆菌、希氏乳杆菌、短乳杆菌、植物乳杆菌中的一种。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述L-谷氨酸脱羧酶固定化酶为微型胶囊球形式，采用如下固定化酶方法制备得到：将L-谷氨酸脱羧酶沉淀精品与亲水性单体溶于纯化水，在不溶于水的有机溶媒中充分乳化，将含有疏水性单体的有机溶媒加入到上述乳化液中发生聚合反应，生成薄膜把L-谷氨酸脱羧酶包裹起来形成微型胶囊球。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：亲水性单体选自聚胺、多元醇中的一种或多种；所述疏水性单体选自乙酸乙烯酯、聚异氰衍生物中的一种或多种；有机溶媒选自脂肪烃或芳香烃中的一种或多种。

13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于：L-谷氨酸脱羧酶质量(kg):亲水性单体质量(kg):纯化水体积(L):有机溶媒体积(L)＝1-5:1-5:10-20:10-20；疏水性单体质量(kg):亲水性单体质量(kg):有机溶媒体积(L)＝1-5:1-5:10-20。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述催化反应结束后可选使用过滤、灭酶活、脱色、浓缩、离心、淋洗、干燥中的一种或多种结合进行后处理纯化。